V roce 1970, většina kapalinová chromatografie byla provedena pomocí pevném nosiči stacionární fáze (také volal sloupec) obsahující nemodifikovaný oxid křemičitý nebo oxid hlinitý pryskyřice. Tento typ techniky se nyní označuje jako chromatografie v normální fázi. Protože stacionární fáze je hydrofilní v této technice, molekuly mají hydrofilní vlastnosti obsažené v mobilní fázi bude mít vysokou afinitu ke stacionární fázi, a proto bude adsorbovat na sloupci balení. Hydrofobní molekuly mají menší afinitu k balení kolony a projdou, aby byly eluovány a detekovány jako první. Eluce z hydrofilní molekuly adsorbované na sloupci balení vyžaduje použití více hydrofilní nebo více polární rozpouštědla v mobilní fázi na posun distribuce částic ve stacionární fázi k mobilní fáze.
chromatografie s reverzní fází je technika, pomocí alkylové řetězce kovalentně vázané na stacionární fázi částice za účelem vytvoření hydrofobní stacionární fáze, která má silnější afinitu k hydrofobním nebo méně polárních sloučenin. Použití hydrofobní stacionární fáze je v podstatě reverzní normální fáze chromatografie, protože polarity mobilní a stacionární fáze byly obrácené – tedy termín chromatografie s reverzní fází. Chromatografie s obrácenou fází využívá polární (vodnou) mobilní fázi. Výsledkem je, že hydrofobní molekuly v polární mobilní fázi mají tendenci adsorbovat se na hydrofobní stacionární fáze a hydrofilní molekuly mobilní fáze průchodu kolonou a eluují jako první. Hydrofobní molekuly mohou být eluovány z kolony snížením polarity mobilní fáze pomocí organického (non-polární) rozpouštědla, což snižuje hydrofobní interakce. Více hydrofobní molekuly, tím více to bude vázat na stacionární fázi, a tím vyšší je koncentrace organické rozpouštědlo, které bude nutné eluovat molekuly.
mnoho matematických a experimentálních úvah používaných v jiných chromatografických metodách platí také pro RPC (například rozlišení separace závisí na délce sloupce). Může být použit pro oddělení široké škály molekul. Obvykle se nepoužívá pro separaci proteinů, protože organická rozpouštědla používaná v RPC mohou denaturovat mnoho proteinů. Z tohoto důvodu se pro separaci proteinů běžně používá normální fázová chromatografie. Denaturace proteinů však může být ve skutečnosti prospěšná při pozdější analýze vzorků získaných chromatografií. Pokud se na analyzovaných proteinech provádí enzymatické štěpení trypsinem, je pro to vhodnější linearizovaný protein. Proto, denaturace proteinů za použití vhodných rozpouštědel, která způsobují rozvinutí proteinů, může být ve skutečnosti úmyslná před odebráním frakcionovaného vzorku hmotnostní spektrometrií.
dnes je RPC často používanou analytickou technikou. Pro použití v RPC je k dispozici celá řada stacionárních fází, což umožňuje velkou flexibilitu při vývoji separačních metod.
stacionární fáze na bázi Křemíkueditovat
jakákoli inertní polární látka, která dosahuje dostatečného balení, může být použita pro chromatografii s obrácenou fází. Nejoblíbenější kolonou je oktadecylový uhlíkový řetězec (C18)-vázaný oxid křemičitý (USP klasifikace L1). Následuje oxid křemičitý vázaný C8 (L7), čistý oxid křemičitý (L3), kyano-vázaný oxid křemičitý (L10) a fenyl-vázaný oxid křemičitý (L11). Všimněte si, že C18, C8 a fenyl jsou určeny na obrácené fázi pryskyřice, zatímco kyano kolony mohou být použity v reverzní fáze režimu v závislosti na analytu a mobilní fáze podmínky. Ne všechny sloupce C18 mají stejné retenční vlastnosti. Povrchová funkcionalizace oxid křemičitý může být provedena v monomerní nebo polymerní reakci s různými krátkými řetězci organosilanes použity v druhém kroku na pokrytí zbývající silanolu skupin (end-capping). Zatímco celkový retenční mechanismus zůstává stejný, jemné rozdíly v povrchových chemiích různých stacionárních fází povedou ke změnám selektivity.
moderní sloupce mají odlišnou polaritu. PFP je pentafluorfenyl. CN je cyano. NH2 je amino. ODS je octadecyl nebo C18. ODCN je kolona smíšeného režimu sestávající z C18 a nitrilu. SCX je silná kationtová výměna (používá se pro separaci organických aminů). SAX je silná aniontová výměna (používá se pro separaci sloučenin karboxylové kyseliny).