denne rapport beskriver fremkomsten af LBCL hos en hund med præeksisterende og vedvarende TSL. I human onkologi betegnes tilstedeværelsen af to forskellige, klonalt uafhængige lymfomer inden for det samme organ “sammensat lymfom”. Denne enhed omfatter < 5% af alle lymfomer hos mennesker , men er ikke tidligere blevet rapporteret hos hunde. Diagnosen af sammensat lymfom kræver morfologisk, immunhistokemisk og molekylær vurdering . I det her rapporterede tilfælde var denne diagnose baseret på de forskellige cytomorfologiske og immunofenotypiske træk ved tumorer såvel som de to forskellige klonale signaturer bestemt ved NGS-baseret klonalitetstest. Transformation af indolente hæmatologiske neoplasmer til mere aggressive former, såsom kronisk lymfocytisk leukæmi til højkvalitets lymfom, er tidligere rapporteret og ser ud til at forekomme lejlighedsvis hos hunde . I dette tilfælde antyder det kombinerede bevis for flere testmodaliteter imidlertid stærkt sammenfaldet af to forskellige lymfomer snarere end udvikling af et indolent lymfom til en mere aggressiv variant.
differentiering af tilbagefald fra udvikling af en de novo tumor er udfordrende for de fleste kræftformer. Lymfoide kræftformer er forskellige i denne henseende, fordi hver lymfocytklon bærer en unik DNA-sekvens, der kan bruges som et genetisk fingeraftryk til at spore lymfocytkloner over tid og på tværs af anatomiske steder. Denne unikke gensekvens genereres tidligt i lymfocytudvikling ved omlejring af antigenreceptorgener og giver hver lymfocytklon unik antigenspecificitet. Klonalitetstest vurderer mangfoldigheden af lymfocytantigenreceptorgener i en given lymfocytpopulation. I den indledende prøve bekræftede klonalitetstest diagnosen TSL baseret på tilstedeværelsen af klonale TRB-og TRG-omlejringer. En enkelt produktiv TRB-omlejring og to uproduktive TRG–omlejringer var i overensstemmelse med en alfa/beta T-cellelinie af den neoplastiske klon, og brugen af TRGV2/TRJ3-2 af begge dominerende kloner antydede en bi-allelisk omlejring snarere end omlejring af to forskellige kassetter på det samme kromosom. De samme omlejringer blev fundet i den anden prøve ved lignende overflod, hvilket antyder persistens af den neoplastiske t-celleklon i lyset af behandlingen. Ud over de klonale TRB-og TRG-omlejringer viste den anden prøve en dominerende IGH-klon, der udgjorde omkring 88% af alle omlejringer. Dette fund bekræfter ikke kun diagnosen af et B-cellelymfom, men antyder også, at B-cellelymfom er en de novo-tumor snarere end en progression af TSL med ændret immunophenotype. I modsætning til celleoverflademarkørekspression, som kan påvirkes af mikromiljøstimuli og en celles udviklingsstadium og levedygtighed, er lymfocytantigenreceptorgenomlejringer stabile gennem hele en lymfocyt . Følgelig, hvis B-celle lymfom havde været en transformeret progression af den tidligere diagnosticerede TSL, ville den dominerende IGH-klon, der blev påvist i den anden prøve, have været til stede i den indledende prøve. Den indledende prøve havde imidlertid et forskelligt polyklonalt B-cellerepertoire, og sekvensen af den klonale IGH-omlejring blev ikke detekteret i den indledende prøve.
anvendelsen af sekventeringsbaseret klonalitetstest gav en klar fordel i forhold til elektroforesebaserede metoder. Traditionelt bruger klonalitetstest gelelektroforese til at visualisere mangfoldigheden af lymfocytantigenreceptorgenarrangementer i en given prøve. Da denne metode kun adskiller antigenreceptorgener efter størrelse, kan det resultere i tvetydige resultater, når signalet fra en neoplastisk klon slukkes af støj fra ikke-neoplastiske lymfocytter. Sekventeringsbaseret klonalitetstest giver en højere ‘klonal opløsning’, fordi den kan skelne lymfocytkloner baseret på sekvens oven på størrelse . I denne undersøgelse identificerede sekventeringsbaseret test let TRB-og TRG-kloner i begge prøver på trods af tilstedeværelsen af en polyklonal baggrund. Endvidere bestemte identifikation af TRB-og TRG-gensekvenserne af den neoplastiske klon utvetydigt, at den dominerende t-celleklon var identisk i begge prøver. Identifikation af kloner ved gensekvens giver en højere tillid til, at begge kloner er identiske, end hvis kloner kun identificeres efter størrelse. En anden fordel ved NGS-baseret klonalitetstest er, at når sekvensen af en neoplastisk klon er bestemt, kan den spores i prøver, selvom den omfatter en minutfraktion af alle omlejringer . I det aktuelle tilfælde tillod identifikation af IGH-gensekvensen af LBCL i den anden prøve at søge efter denne ‘indekssekvens’ i den indledende prøve. Det faktum, at IGH-indekssekvensen ikke kunne findes i den indledende prøve, antyder kraftigt, at denne b-celleklon ikke var til stede på det tidspunkt, hvor TSL oprindeligt blev diagnosticeret. Det bemærkes, at følsomheden ved at detektere en indeksklon er meget afhængig af sekventeringsdybden.
selvom NGS var nyttigt til at identificere tilstedeværelsen af to forskellige kloner i dette tilfælde, var andre diagnostiske tilgange også nødvendige. En hel påvirket lymfeknude blev oprindeligt fjernet og vurderet histopatologisk og immunhistokemisk for at bekræfte den cytologiske diagnose af TSL. Sektioner bestod af en homogen population af små lymfocytter med sjældne restfollikler. Cytologisk evaluering af et aspirat af den kontralaterale popliteale lymfeknude indsamlet 1 år efter den indledende prøve identificerede celler morfologisk i overensstemmelse med LBCL snarere end TSL, hvilket førte til immunofenotypisk vurdering. Strømningscytometri bekræftede LBCL, som i stort set alle tilfælde hos hunde er en DLBCL . Selvom histopatologisk vurdering af den berørte lymfeknude ikke blev udført, var strømningscytometriske fund af CD21, CD45 og MHC II positivitet kombineret med stor cellestørrelse meget konsistent med diagnosen DLBCL . Blandt lymfomer hos hunde er TSL en unik enhed, da selv uden terapi kan neoplasmen ikke udvikle sig overhovedet eller kun langsomt; der er en stærk race forkærlighed; pan-leukocytantigenet CD45 er typisk ikke detekterbar på tumorceller; og B-celleantigenet CD21 kan være til stede på lavt niveau . Desuden er celler med denne immunofenotype blevet identificeret hos ældre Golden Retriever-hunde uden tegn på lymfoid neoplasi, og nogle af disse hunde blev også rapporteret at have klonale t-cellepopulationer . Bemærk, opløsningen af klonale toppe med elektroforesebaserede metoder er lavere end med sekventeringsbaserede metoder, og det kan tænkes, at klonale populationer identificeret ved elektroforese kan være mere forskellige, hvis de vurderes ved sekventering. Derfor forbliver mange aspekter af TSL ‘ s Biologi ufuldstændigt karakteriseret.
det er muligt, at hunden i denne rapport havde en øget risiko for at udvikle sekundære neoplasmer efter stråling af hjernetumoren. Strålebehandling inducerer en lang række bivirkninger, herunder systemiske virkninger fra lokal terapi . Sådanne virkninger kan kompromittere immunsystemet, hvilket igen kan reducere immunovervågning og øge risikoen for efterfølgende kræftudvikling. Mens hos mennesker er tumorbestråling oftest forbundet med sekundære myeloide neoplasmer, er lignende foreninger hos hunde ubestemt . Generelt er viden om genetiske læsioner, der ligger til grund for lymfomagenese hos hunde, sparsom, og et begrænset sæt mutationer var mere stærkt forbundet med race end med lymfomtype .
behandling og prognose af sammensat lymfom hos mennesker varierer afhængigt af histologisk undertype . DLBCL er et aggressivt lymfom med median progressionsfri overlevelse på 251-252 dage, når det behandles med kombinationskemoterapi . Induktionsbehandling for hunden i denne rapport var en standarddosis af L-asparaginase og vincristin, men et varigt klinisk respons forventedes ikke på grund af den tidligere langtidseksponering for glukokortikoider . Desværre, på trods af en indledende positiv respons, blev behandlingen ikke fortsat, og resultatet kunne ikke vurderes fuldt ud.
patienten var blevet diagnosticeret med en intrakraniel masse, der var mest konsistent med gliom flere måneder før den første diagnose af lymfom. Uden histopatologisk evaluering kan ikke-neoplastiske årsager til hjernemasser, såsom vaskulære hændelser eller granulomatøs betændelse, helt udelukkes. Imidlertid var de kliniske træk og MR-egenskaber ved intraaksial placering, T2/FLAIR hyperintensitet, T1 hypointensity, mangel på kontrastforbedring og mass effect mest antydende for en neoplasma, såsom et lavgradigt gliom . Endelig strålebehandling resulterede i mindst 16 måneders objektiv tumorrespons hos denne patient, hvilket er ens eller lidt længere end rapporteret for andre intraaksiale tumorer .
Begrænsninger for denne undersøgelse var utilgængeligheden af en biopsi fra lymfeknude med samtidig TSL / LBCL og manglende vurdering efter slagtning. Histopatologi og immunhistokemi af det andet lymfom ville have tilladt en mere endelig diagnose af LBCL og illustreret morfologiske fund forbundet med samtidig TSL og LBCL. Tilsvarende ville evaluering efter slagtning have muliggjort en endelig identifikation af hjernelæsionen og omfanget af lymfom. Ikke desto mindre blev bevis for et sammensat lymfom i dette tilfælde betragtet som meget stærkt baseret på flere sofistikerede og komplementære diagnostiske tilgange.som konklusion fremhæver denne rapport om et sammensat lymfom hos en hund værdien af flere diagnostiske tilgange til at skelne mellem to de novo lymfomer snarere end transformation af en enkelt klon.