Ez a jelentés leírja az LBCL megjelenését egy olyan kutyában, amelynek már volt és tartós TZL-je. Az emberi onkológiában két különálló, klónálisan független limfóma jelenlétét ugyanazon szerven belül “összetett limfómának”nevezik. Ez az entitás a < az összes limfóma 5% – át tartalmazza emberben , de korábban nem jelentettek kutyáknál. Az összetett limfóma diagnózisa morfológiai, immunhisztokémiai és molekuláris értékelést igényel . Az itt közölt esetben ez a diagnózis a tumorok eltérő citomorfológiai és immunfenotípusos jellemzőin, valamint az NGS-alapú klónozási teszttel meghatározott két különálló klonális aláíráson alapult. Korábban beszámoltak az indolens hematológiai daganatok agresszívebb formákká történő átalakulásáról, mint például a krónikus limfocita leukémia magas fokú limfómává, és úgy tűnik, hogy alkalmanként előfordul kutyáknál . Ebben az esetben azonban a többszörös tesztelési módok együttes bizonyítéka erősen arra utal, hogy két különálló limfóma egybeesik, nem pedig egy indolens limfóma agresszívebb variánssá alakul.
a relapszus megkülönböztetése a De novo tumor kialakulásától a legtöbb ráktípus esetében kihívást jelent. A limfoid rákok ebben a tekintetben különböznek, mivel minden limfocita klón egyedi DNS-szekvenciát hordoz, amely genetikai ujjlenyomatként használható a limfocita klónok nyomon követésére az idő múlásával és az anatómiai helyeken. Ez az egyedülálló génszekvencia a limfociták fejlődésének korai szakaszában jön létre az antigénreceptor gének átrendeződésével, és minden limfocita klónt egyedi antigén specifitással ruházza fel. A klónozási vizsgálat a limfocita antigén receptor gének sokféleségét értékeli egy adott limfocita populációban. A kezdeti mintában a klonalitásvizsgálat megerősítette a tzl diagnózisát a klonális TRB és TRG átrendeződések jelenléte alapján. Egyetlen produktív TRB-átrendeződés és két nem produktív TRG-átrendeződés konzisztens volt a neoplasztikus klón alfa/béta T-sejtvonalával, és a trgv2/TRJ3–2 mindkét domináns klón általi használata bi-allél átrendeződésre utalt, nem pedig két különböző kazetta átrendeződésére ugyanazon a kromoszómán. Ugyanezeket az átrendeződéseket találtuk a második mintában hasonló bőségben, ami a neoplasztikus T-sejt klón tartósságára utal a kezelés előtt. A klonális TRB és TRG átrendeződések mellett a második minta egy domináns agyváltó klónt mutatott, amely az összes átrendeződés körülbelül 88% – át tette ki. Ez a megállapítás nemcsak megerősíti a B-sejtes limfóma diagnózisát, hanem azt is sugallja, hogy a B-sejtes limfóma de novo tumor, nem pedig a tzl progressziója megváltozott immunofenotípussal. Ellentétben a sejtfelszíni marker expresszióval, amelyet a mikrokörnyezeti ingerek, valamint a sejt fejlődési stádiuma és életképessége befolyásolhat, a limfocita antigén receptor gén átrendeződése a limfocita egész életében stabil . Következésképpen, ha a B-sejtes limfóma a korábban diagnosztizált TZL transzformált progressziója volt, akkor a második mintában kimutatott domináns IGH klónnak jelen kellett volna lennie a kezdeti mintában. A kezdeti mintának azonban változatos poliklonális B-sejt repertoárja volt, és a klonális agyváltó átrendeződés szekvenciáját a kezdeti mintában nem detektálták.
a szekvenálás-alapú klónozási tesztelés egyértelmű előnyt nyújtott az elektroforézis-alapú módszerekkel szemben. Hagyományosan a klónozási tesztelés gélelektroforézist alkalmaz a limfocita antigén receptor génelrendezések sokféleségének vizualizálására egy adott mintában. Mivel ez a módszer csak az antigénreceptor géneket különbözteti meg Méret szerint, kétértelmű eredményeket eredményezhet, ha egy neoplasztikus klón jelét a nem neoplasztikus limfociták zajával leállítják. A szekvenálás-alapú klónozási tesztelés nagyobb ‘klonális felbontást’ eredményez, mert meg tudja különböztetni a limfocita klónokat a méret tetején lévő szekvencia alapján . Ebben a tanulmányban a szekvenáláson alapuló tesztelés mindkét mintában könnyen azonosította a TRB és a TRG klónokat a poliklonális háttér jelenléte ellenére. Ezenkívül a neoplasztikus klón TRB és TRG génszekvenciáinak azonosítása egyértelműen megállapította, hogy a domináns T-sejt klón mindkét mintában azonos volt. A klónok génszekvencia szerinti azonosítása nagyobb bizalmat ad abban, hogy mindkét klón azonos legyen, mintha a klónokat csak méret szerint azonosítanák. Az NGS-alapú klónozási tesztelés másik előnye, hogy miután meghatározták a neoplasztikus klón szekvenciáját, akkor is nyomon követhető a mintákban, ha az összes átrendeződés egy perc töredékét tartalmazza . Ebben az esetben az LBCL agyváltó génszekvenciájának azonosítása a második mintában lehetővé tette ennek az indexszekvenciának a keresését a kezdeti mintában. Az a tény, hogy az IGH index szekvencia nem található meg a kezdeti mintában, erősen arra utal, hogy ez a B-sejt klón nem volt jelen abban az időben, amikor a TZL-t eredetileg diagnosztizálták. Megjegyzendő, hogy az index klón észlelésének érzékenysége nagymértékben függ a szekvenálási mélységtől.
bár az NGS hasznos volt két különálló klón jelenlétének azonosítására ebben az esetben más diagnosztikai megközelítésekre is szükség volt. Kezdetben egy teljes érintett nyirokcsomót távolítottak el, és kórszövettanilag és immunhisztokémiailag értékelték a tzl citológiai diagnózisának megerősítésére. A szekciók kis limfociták homogén populációjából álltak, ritka maradék tüszőkkel. A kontralaterális poplitealis nyirokcsomó aspirátumának citológiai értékelése 1 évvel a kezdeti minta után azonosított sejtek morfológiailag összhangban vannak az LBCL – lel, nem pedig a TZL-lel, ami immunofenotípusos értékelést váltott ki. Az áramlási citometria megerősítette az LBCL-t, amely gyakorlatilag minden esetben kutyáknál DLBCL . Bár az érintett nyirokcsomó kórszövettani vizsgálatát nem végezték el, a CD21, CD45 és MHC II pozitivitás nagy sejtmérettel kombinált áramlási citometriai eredményei nagymértékben összhangban voltak a DLBCL diagnózisával . A kutyák limfómái között a TZL egyedülálló entitás, mivel terápia nélkül is előfordulhat, hogy a neoplazma egyáltalán nem vagy csak lassan halad előre; van egy erős fajta predilekció; a PAN-leukocita antigén CD45 jellemzően nem észlelhető a tumorsejteken; és a B-sejt antigén CD21 alacsony szinten lehet jelen . Továbbá, az ilyen immunfenotípusú sejteket idősebb Golden Retriever kutyákban azonosították, lymphoid neoplasia bizonyíték nélkül, és néhány ilyen kutyáról klonális T-sejt populációt is jelentettek . Megjegyzendő, hogy a klonális csúcsok felbontása elektroforézis alapú módszerekkel alacsonyabb, mint a szekvenálás alapú módszerekkel, és elképzelhető, hogy az elektroforézissel azonosított klonális populációk változatosabbak lehetnek, ha szekvenálással értékelik. Ezért a tzl biológiájának számos aspektusa továbbra is hiányosan jellemezhető.
lehetséges, hogy a jelentésben szereplő kutyának fokozott kockázata volt a másodlagos daganatok kialakulásának az agydaganat sugárzását követően. A sugárterápia számos káros hatást vált ki, beleértve a helyi terápia szisztémás hatásait is . Az ilyen hatások veszélyeztethetik az immunrendszert, ami viszont csökkentheti az immunfelügyeletet és növelheti a későbbi rák kialakulásának kockázatát. Míg az emberekben a tumor besugárzása leggyakrabban másodlagos mieloid daganatokhoz kapcsolódik, a kutyákban hasonló asszociációk nincsenek meghatározva . Általánosságban elmondható, hogy kutyáknál a lymphomagenesis alapjául szolgáló genetikai léziók ismerete ritka, és a mutációk korlátozott csoportja inkább a fajtával, mint a lymphoma típusával volt szoros kapcsolatban .
az összetett lymphoma kezelése és prognózisa emberben a szövettani altípustól függően változik . A kutya TZL indolens betegségben szenved, de a DLBCL agresszív limfóma, amelynek medián progressziómentes túlélése 251-252 nap, kombinált kemoterápiával kezelve . Ebben a jelentésben a kutyánál az indukciós terápia az L-aszparagináz és a vinkrisztin standard dózisa volt, de tartós klinikai válasz nem várható a korábbi hosszú távú glükokortikoid-expozíció miatt . Sajnos a kezdeti kedvező válasz ellenére a terápiát nem folytatták, és az eredményt nem lehetett teljes mértékben értékelni.
a lymphoma első diagnózisa előtt néhány hónappal a gliomának leginkább megfelelő intracranialis tömeget diagnosztizáltak a betegnél. Kórszövettani értékelés nélkül az agytömegek nem neoplasztikus okai, például vaszkuláris események vagy granulomatózus gyulladás nem zárható ki teljesen. Az intra-axiális lokalizáció, a T2/FLAIR hiperintenzitás, a T1 hypointenzitás, a kontrasztjavítás hiánya és a mass effect klinikai jellemzői és MRI jellemzői azonban leginkább egy neoplazmára, például alacsony fokú gliomára utaltak . A végleges sugárterápia legalább 16 hónapos objektív tumorválaszt eredményezett ebben a betegben, ami hasonló vagy valamivel hosszabb, mint más intra-axiális daganatok esetében .
ennek a vizsgálatnak a korlátai voltak a nyirokcsomóból származó biopszia hiánya egyidejű TZL/LBCL-lel, valamint a post mortem értékelés hiánya. A második lymphoma kórszövettana és immunhisztokémiája lehetővé tette volna az LBCL pontosabb diagnosztizálását, és illusztrálta volna az egyidejű TZL és LBCL-hez kapcsolódó morfológiai megállapításokat. Hasonlóképpen, a post mortem értékelés lehetővé tette volna az agyi elváltozás és a limfóma mértékének meggyőző azonosítását. Ennek ellenére a kompozit lymphoma bizonyítékát ebben az esetben nagyon erősnek tekintették a többszörös kifinomult és kiegészítő diagnosztikai megközelítések alapján.
összefoglalva, ez a jelentés egy összetett limfómáról egy kutyában kiemeli a többszörös diagnosztikai megközelítések értékét, hogy megkülönböztessék a két de novo limfómát, nem pedig egyetlen klón átalakulását.