az 1970-es években a legtöbb folyadékkromatográfiát szilárd hordozóval végeztük állófázis (más néven oszlop), amely módosítatlan szilícium-dioxid vagy alumínium-oxid gyantákat tartalmaz. Ezt a technikát ma már normál fázisú kromatográfiának nevezik. Mivel az állófázis ebben a technikában hidrofil, a mozgó fázisban lévő hidrofil tulajdonságokkal rendelkező molekulák nagy affinitással rendelkeznek az állófázishoz, ezért adszorbeálódnak az oszlopcsomagoláshoz. A hidrofób molekulák kevésbé affinitást tapasztalnak az oszlopcsomagoláshoz, és áthaladnak, hogy először eluálódjanak és észleljenek. Az oszlopcsomagoláshoz adszorbeált hidrofil molekulák elúciója több hidrofil vagy több poláris oldószer használatát igényli a mozgó fázisban, hogy a részecskék eloszlását az álló fázisban a mozgó fázis felé tolják.
a fordított fázisú kromatográfia olyan technika, amely alkilláncokat alkalmaz kovalensen kötve az állófázis részecskéihez annak érdekében, hogy hidrofób állófázist hozzon létre, amelynek erősebb affinitása van a hidrofób vagy kevésbé poláros vegyületekhez. A hidrofób állófázis használata lényegében a normál fáziskromatográfia fordítottja, mivel a mozgó és az álló fázisok polaritása fordított – ezért a fordított fázisú kromatográfia kifejezés. A fordított fázisú kromatográfia poláris (vizes) mobil fázist alkalmaz. Ennek eredményeként a poláris mozgófázisban lévő hidrofób molekulák hajlamosak adszorbeálódni a hidrofób állófázisba, és a mozgófázisban lévő hidrofil molekulák áthaladnak az oszlopon, és először eluálódnak. A hidrofób molekulák eluálhatók az oszlopból a mobil fázis polaritásának csökkentésével szerves (nem poláros) oldószer alkalmazásával, ami csökkenti a hidrofób kölcsönhatásokat. Minél hidrofóbabb a molekula, annál erősebben kötődik az állófázishoz, annál nagyobb a szerves oldószer koncentrációja, amely a molekula eluálásához szükséges.
az egyéb kromatográfiás módszerekben Alkalmazott Matematikai és kísérleti megfontolások közül sok az RPC-re is vonatkozik (például az elválasztási felbontás az oszlop hosszától függ). Ezt fel lehet használni a szétválasztása sokféle molekulák. Általában nem használják a fehérjék elválasztására, mert az RPC-ben használt szerves oldószerek sok fehérjét denaturálhatnak. Emiatt a normál fázisú kromatográfiát gyakrabban használják a fehérjék elválasztására. A fehérjék denaturálása azonban valóban előnyös lehet A kromatográfiából nyert minták későbbi elemzésében. Ha az elemzett fehérjéken enzimatikus emésztést végeznek tripszinnel, akkor erre alkalmasabb a linearizált fehérje. Ezért a fehérjék denaturálása megfelelő oldószerekkel, amelyek a fehérjék kibontakozását okozzák, valójában szándékos lehet, mielőtt a frakcionált mintát tömegspektrometriával vennék.
ma az RPC gyakran használt analitikai technika. Az RPC-ben különféle állófázisok állnak rendelkezésre, amelyek nagy rugalmasságot tesznek lehetővé az elválasztási módszerek fejlesztésében.
szilícium-dioxid alapú álló fázisokszerkesztés
bármely inert poláris anyag, amely elegendő csomagolást ér el, felhasználható fordított fázisú kromatográfiához. A legnépszerűbb oszlop egy oktadecil szénlánc (C18) kötésű szilícium-dioxid (USP L1 osztályozás). Ezt követi a C8 kötésű szilícium-dioxid (L7), a tiszta szilícium-dioxid (L3), a ciánkötésű szilícium-dioxid (L10) és a fenilkötésű szilícium-dioxid (L11). Vegye figyelembe, hogy a C18, C8 és fenil dedikált fordított fázisú gyanták, míg a ciano oszlopok fordított fázisú üzemmódban használhatók az analit és a mobil fázis körülményeitől függően. Nem minden C18 oszlop rendelkezik azonos retenciós tulajdonságokkal. A szilícium-dioxid felületi funkcionalizálása monomer vagy polimer reakcióban hajtható végre különböző rövid láncú szerves szilánokkal, amelyeket második lépésben a fennmaradó szilanol-csoportok lefedésére használnak (végzáró). Míg az Általános retenciós mechanizmus változatlan marad, a különböző állófázisok felületi kémiai finom különbségei a szelektivitás változásához vezetnek.
a Modern oszlopok eltérő polaritással rendelkeznek. A PfP pentafluorfenil. A CN Ciano. Az NH2 amino. Az ODS oktadecil vagy C18. Az ODCN egy vegyes üzemmódú oszlop, amely C18-ból és nitril-ből áll. Az SCX erős kationos csere (szerves aminok elválasztására használják). A SAX erős anioncsere (karbonsavvegyületek elválasztására használják).