In questo corso, useremo il proteobacterium, E. coli, per propagare copie di METgenes sui plasmidi, che sono piccoli cerchi di DNA che si replicano nel citoplasma di E. coli. A differenza dei ceppi di E. coli che si sente parlare in focolai di origine alimentare, il nostro ceppo di laboratorio è stato progettato per l’uso in laboratori di biologia molecolare e non è in grado di colonizzare il tratto intestinale umano. E. coli
sono particolarmente utili ai biologi molecolari perché crescono rapidamente a densità molto elevate
in terreni di coltura di laboratorio, raggiungendo densità di 1-10 miliardi di cellule per mL. Anche se E. coli sono 10-100 volte più piccolo di cellule di lievito, il loro numero puro e il loro movimento distinto li rende visibili con il microscopio ottico.
Microscopio ottico Leica DM500
Per osservare E. coli con qualsiasi dettaglio, è necessario utilizzare l’obiettivo 100X, noto anche come lente ad immersione in olio. Questo è l’obiettivo più lungo, più potente e più costoso sul microscopio, che richiede particolare attenzione quando lo si utilizza. Come suggerisce il nome, l’obiettivo 100X è immerso in una goccia d’olio sul vetrino. L’olio per immersione ha lo stesso indice di rifrazione del vetro, quindi impedisce alla luce di piegarsi mentre entra nell’obiettivo. L’olio deve essere rimosso immediatamente dalla lente 100X dopo l’uso. L’olio non deve mai toccare le lenti 4X, 10X o 40X, che vengono distrutte dall’olio.