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Il-27と正の相関血清IgGレベルの上昇は、HBV関連急性-慢性肝不全患者における悪い転帰を示す可能性があります

概要

背景とAims。 慢性肝疾患患者では血清免疫グロブリンが頻繁に増加するが、HBV関連急性-慢性肝不全(HBV-ACLF)患者における血清免疫グロブリンの役割およびインターロイキン-27(IL-27)との相関についてはほとんど知られていない。 本研究は、血清免疫グロブリン(IgG、IgA、およびIgM)レベルの役割とHBV-ACLFを有する非irrhotic患者におけるIL-27との関連付けを決定することを目的とした。 メソッド。 サンプルは、HBV-ACLF、二十から四慢性B型肝炎(CHB)被験者、および十八正常なコントロールを持つ三十人の患者から評価しました。 HBV-ACLFの疾患重症度を評価した。 血清IL-27レベルは、酵素結合免疫吸着アッセイによって調べた。 免疫グロブリンレベルはimmunoturbidimetric試金を使用して査定されました。 免疫グロブリンレベルとIL-27との間の相関を分析した。 受信機動作特性(ROC)曲線は、3ヶ月の死亡率を予測するために使用されました。 結果。 25(83.3%)HBV-ACLF患者は血清IgGレベルが上昇していた(>1ULN)、14(46.7%)患者はIgAが上昇し、15(50%)はIgMが上昇していた。 Igg,Iga,およびIgmレベルはHBV-ACLF患者ではCHB患者および正常対照よりも高かった。 さらに,Igg,Iga,IgmレベルはTbilレベルと正の相関を示したが,プロトロンビン時間活性(PTA)レベルと負の相関を示した。 さらに、IgGレベルは、生存中のHBV-ACLF患者よりも非生存患者で有意に増加し、MELDスコア(、)と正の相関を示した。 また、Iggレベルは、HBV−ACLF患者におけるIL−2 7レベルと正の相関を示した(、)。 さらに、ROC曲線は、IgGレベルがHBV-ACLF患者における3ヶ月の死亡率を予測できることを示した(ROC曲線の下の面積:0.752)。 結論。 Hbv-ACLF患者では血清免疫グロブリンが優先的に上昇していることを示した。 IgGレベルはIL-27と正の相関があり、HBV-ACLF患者の予後を予測することができます。

1. はじめに

急性-慢性肝不全(ACLF)は、既存の慢性肝疾患を有する患者における多臓器不全につながる肝細胞の突然の喪失を特徴とする劇的な臨床シ 中国におけるACLFの主な原因は慢性HBV感染であるが、欧米諸国ではアルコール性肝硬変の結果であることが多い。 HBV-ACLFの不明な病因および有効な処置の選択の欠乏は非常に高い死亡率で起因します。 実質的な証拠は、免疫媒介性炎症がHBV−ACLFにおいて本質的な役割を果たすことを示す。 特に、自然免疫細胞および適応免疫細胞の異なるアームは、HBV−ACLFの発生および進行に重要な貢献をする。古典的に体液性免疫のコア部分と呼ばれる免疫グロブリンは、いくつかのタイプの肝疾患において重要な役割を果たすことが示されている。

血清免疫グロブリンは慢性肝疾患および硬変患者で頻繁に上昇する。 さらに,自己免疫性肝炎における免疫グロブリンG(Igg)の上昇,アルコール性肝疾患における免疫グロブリンA(Iga)の上昇,原発性胆道胆管炎(PBC)における免疫グロブリンM(Igm)の上昇などの特定の肝疾患において血清免疫グロブリンの上昇の特徴的なパターンが観察され,臨床診療における診断に適用できる。 これらの証拠は、免疫グロブリンと免疫媒介性肝障害とを強く関連させる。 しかし、HBV-ACLF患者における免疫グロブリンの役割については、より少ない情報が利用可能であった。インターロイキン-27(IL-27)は、IL-12ファミリーに属する比較的新しいサイトカインである。

インターロイキン-27(IL-27)は、IL-12ファミリーに属する比較的新しいサイトカインである。 IL-27は、Epstein-Barrウイルス誘導遺伝子3(EBI3)とIL-27p28からなるヘテロ二量体サイトカインであり、GP130とIL-27RAからなる受容体に結合し、JAK-STATおよびMAPKシグナリング経路を活性化する。 IL-27は、文脈に応じて様々なタイプの細胞に作用する炎症誘発性および抗炎症性の両方の特性を有する。 ほとんどの研究は、主にT細胞に対するIL-27の効果に焦点を当てています。 また、IL−2 7は、B細胞による免疫グロブリンの発現を調節することが証明されている。 いくつかの最近の報告は、IL-27がB細胞によるIgg1の産生を誘導し、抗体駆動自己免疫疾患を支持することを示した。 しかし、別の報告は、IL-27が白血病B細胞の増殖を直接阻害することができることを明らかにした。 今日まで、HBV-ACLF患者におけるIL-27レベルと免疫グロブリンの発現との間の相関についてはあまり知られていない。

HBV関連急性肝不全(HBV-ALF)患者を登録する重要な報告は、IgGおよびIgMを分泌する形質細胞の大量の蓄積が肝組織に見出されたことを明らかにした。 HBV-ALFとHBV-ACLFとの間の同様の病原機序を考慮して,hbv-ACLF患者で血清免疫グロブリンが上昇し,より高いレベルが好ましくない転帰を示す可能性があると仮定した。 したがって、本研究では、我々の目的は、血清免疫グロブリンレベル(IgG、IgA、およびIgM)の役割とHBV-ACLFを有する非irrhotic患者におけるIL-27との相関を決定することでした。

2. 患者および方法

2.1。 研究デザインと患者

この研究では、HBV-ACLF患者の病因を調査するプロスペクティブ研究からの臨床データと血清サンプルを使用しました。 簡単に言えば、2009年から2010年にかけて当科に入院した三十人のHBV-ACLF患者が登録された。 包含の規準は出版された仕事および臨床練習の指針に基づいていました。 参加する意思があり、研究に同意したhbv-ACLFを有する成人非慢性患者は、以前に記載された包含基準に基づいて登録された。 除外基準は以下の通りであった。: (1)自己免疫性肝疾患(自己免疫性肝炎およびPBC)、ウィルソン病、または癌を含む他の肝疾患の証拠;(2)他の肝炎ウイルスまたはHIVウイルスとの共感染;(3)人工肝 登録前の画像検査で小結節性肝臓が認められたとき,肝硬変と臨床的に診断された。 各患者は支持的な内部治療で治療された。 すべてのHBV-ACLF患者は、少なくとも6ヶ月フォローアップされました。 臨床転帰は生存または非生存として記録された。 同期間に当院からの慢性B型肝炎(CHB)患者二十四人と正常対照(N c)を対照として募集した。 CHBは、以前に記載された基準に基づいて診断された。 臨床評価は、治療前の入院時に行われた。 入院時に末梢血を採取し、血清を分離し、分析されるまで-80℃で保存した。 この研究はヘルシンキ宣言に従って実施され、議定書は当病院の倫理委員会によって評価され、承認された。 書面によるインフォームドコンセントは、研究の前に各参加者から得られた。

2.2. Igg、Iga、およびIgmの発現の分析</h5><p>ヒトIgg、Iga、およびIgm定量キットは、Roche Diagnostics(Indianapolis、IN、USA)から購入した。 IgG、IgA、およびIgMの血清濃度を、自己分析器(TBA-30FR Toshiba,Tokyo,Japan)を介して、製造業者のガイドラインに従って免疫超比測定アッセイを用いて分析した。 すべての値を、IgGについて8〜16g/L、IgAについて0.7〜3.3g/L、およびIgMについて0.5〜2.2g/Lとして報告された正常範囲と比較した。2.3.

血清IL−2 7濃度を、市販キット(Biolegend,San Diego,C A,USA)を使用して、製造業者のプロトコールに従って、sandway enzyme−linked immunosorbent assay(ELISA)によって定量した。 血清IL−2 7レベルを、製造業者によって提供される既知のサイトカイン濃度を有する標準試料を使用して定量し、pg/mlとして表した。 検出感度は11pg/mLであった。2.4.

B型肝炎s抗原(Hbsag)、B型肝炎e抗原(Hbeag)、B型肝炎e抗体(Hbeab)、およびB型肝炎c抗体(HBcAb)を含む血清H B Vマーカーを、Elecsysシステム(Hoffmann−La Roche、Basel、Switzerland)を用いて決定した。 HBV−DNAレベルを、ABI7 3 0 0(Applied Biosystems,Foster City,C A,USA)を用いたリアルタイム定量PCRによって定量した。 HBV−DNAの検出限界は1 0 0IU/mlであった。 肝臓生化学的アッセイを、自動分析器(TBA−3 0FR Toshibas,Tokyo,Japan)を用いて定量した。 プロトロンビン時間活性(PTA)は、自動止血/血栓症分析装置(STA Compact,Holliston,M A,USA)を使用して測定した。2.5.

合併症および疾患の重症度の評価

完全な病歴、身体検査、および実験室パラメータは、すべてのHBV-ACLF患者について評価しました。 合併症(自発性細菌性腹膜炎、肝性脳症、肝腎症候群、上部消化管出血を含む)を注意深く監視し、以前に記載された基準に基づいて診断した。 末期肝疾患(MELD)スコアおよびMELD−N Aスコアについてのモデルを使用して、疾患の重症度を評価し、前述のように計算した。 さらに、最近開発されたACLF患者の分類および予後評価のための慢性肝不全コンソーシアム(CLIF-C)ACLFスコアも疾患の重症度を評価するために適用された。 CLIF−C ACLFスコアは以下のように計算した:。2.6.

2.6. 0ソフトウェア(IBM Corporation,Armonk,NY,USA)を使用して分析し、頻度、中央値、および範囲として、またはasで表した。 変数の差は、A NOVAおよびStudent検定(正規分布データの場合)またはKruskal−WallisおよびMann−Whitney検定(非正規分布データの場合)を用いて分析した。 カテゴリデータはカイ二乗検定とFisherの正確検定を用いて解析した。 相関分析は、PearsonまたはSpearman試験によって評価した。 受信機動作特性(ROC)曲線は、3ヶ月の死亡率を予測するために使用されました。 DELONG試験を用いてROC曲線の比較を行った。 両面は統計的に有意であると考えられた。

3. 結果

3.1. 患者の特徴

HBV-ACLF、CHB、および正常対照の特徴を表1に示す。 年齢()または性別比()については、三つのグループ間に有意差はなかった。 さらに,HBEAG()の存在に関して,CHB群とHBV-ACLF群の間に統計的に有意な差は認められなかった。

3.2. IgG、IgA、およびIgMの血清レベルは、HBeAg
3.3の存在とは無関係にHBV-ACLF患者で増加した。 血清IgG、IgA、およびIgMレベルの増加は、HBV感染患者における肝損傷と密接に関連していた
3.4。 IgGレベルは、HBV-ACLF患者の臨床転帰と密接に関連していた

我々は、HBV-ACLFの自然史、上昇期()、高原期()、および下降期()に応じて三つの段階に患者を層別化した。 興味深いことに、IgGレベルは、上昇期の患者(、)およびプラトー期の患者(、)よりも下降期の患者()で有意に低かった。 しかし、異なる段階のHbv-ACLF患者の間でIgAまたはIgMレベルに有意差はなかった(図3(a))。 フォローアップ期間中,hbv-ACLF患者は生存したが,十二人は死亡した。 次に,臨床転帰とIgg,Iga,Igmの発現との相関を検討した。 血清IgGレベルは、生存患者よりも非生存HBV-ACLF患者(、)で有意に高かった(、、;図3(b))。 また、生存していないHBV-ACLF患者(中央値2.48g/L)では、生存しているHBV-ACLF患者(中央値2.07g/L、図3(b))よりも血清IgMレベルがわずかに高いことに気づいた。 しかし、生存していないHBV-ACLF患者()と生存している患者(、;図3(b))との間にIgAレベルに有意差はなかった。 MELDスコア、MELD−N Aスコア、およびCLIF−C ACLFスコアは、HBV−ACLFにおける疾患重症度を評価するために広く適用される。 この研究では、これらのパラメータは、入院時に記載されたように計算された。 結果は、、およびMELDスコア、MELD−N Aスコア、およびCLIF−C ACLFスコアであった。 次に,免疫グロブリンレベル(Igg,Iga,およびIgm)とこれらのパラメータとの間の相関をPearson分析によって決定した。 興味深いことに、IggレベルとMELDスコア(、)との間、IgaレベルとCLIF−C ACLFスコアとの間に正の相関が見出された(、;図3(c))。 そして、IggレベルとMELD−N Aスコアとの間に正の相関傾向が見出された(、;図3(c))。 However, no significant correlations existed between IgM levels and these scores in HBV-ACLF patients (all ).


(a)

(b)

(c)


(a)
(b)
(c)

Figure 3
IgG levels were closely associated with disease severity in HBV-ACLF patients. (a)Iggレベルは,下降期のHBV-ACLF患者では上昇期の患者()およびプラトー期の患者()よりも有意に低かった。 しかし,異なる段階のHbv-ACLF患者の間でIgaまたはIgmレベルに有意差はなかった。 (b)血清Iggレベルは生存患者よりも非生存HBV-ACLF患者で有意に高かった()。 また、生存していないHBV-ACLF患者では、生存している患者よりも血清IgMレベルがわずかに高いことに気づいた()。 (c)IggレベルとMELDスコアとの間、IgaレベルとCLIF−C ACLFスコアとの間に正の相関が見出された。 また,IggレベルとMELD-N Aスコアとの間には正の相関傾向が認められた。 ;;ns:有意ではない;実線:線形成長傾向;:相関係数。
3.5。 IL-27レベルは、HBV感染患者における免疫グロブリンと正の相関を示した

IL-27は、B細胞による免疫グロブリンの産生を調節することが証明さ 本研究では、血清IL-27レベルは、HBV-ACLF患者(pg/mL)でCHB群(pg/mL、)およびNC群(pg/mL、)よりも有意に高かった。 次に、IL-27レベルと免疫グロブリンレベルとの間の相関は、SpearmanまたはPearson分析によって調べた。 興味深いことに、Iggレベルは、IL−2 7レベル(、)と正の相関を示し、Hbv−ACLF患者におけるIgmレベルとIL−2 7レベル(、;図4(a))との間に正の相関傾向が見出された。 さらに、IL−2 7レベルとIggレベル(、)、Igaレベル(、)、およびIgmレベル(、)との間に正の相関が見出された。, ; 図4(b))HBV感染患者における。 これらの結果は、IL-27がHBV感染患者における免疫グロブリンの産生を誘導する可能性があることを示している。div>


(a)

(b)

(a)
(a)
(a)
(a)
(a)
(a)

(b)

図4
il-27レベルは、免疫グロブリンの発現と正の相関を示した。 (a)Iggレベルは、IL−2 7レベルと正の相関があることが見出された。; そして、Hbv-ACLF患者におけるIgMレベルとIL-27レベルの間に正の相関傾向が見出された。 (b)HBV感染患者におけるIL-27レベルと血清免疫グロブリンレベル(IgG、IgA、およびIgM)との間に正の相関が見出された。 実線:線形成長の傾向;:相関係数。 値が表示されます。
3.6。 IgGレベルが高いと、Hbv-ACLF患者の予後不良を予測する可能性があります

3ヶ月の死亡率は、HBV-ACLF患者の長期予後のための広く受け入れられている指 現在の研究では、12人のHBV-ACLF患者が最初の3ヶ月で死亡し、18人の患者がフォローアップ期間中に生存した。 したがって、3ヶ月の死亡率は40%であった。 最後に、Iggレベルを、HBV−ACLF患者の3ヶ月死亡率を予測するために評価し、IL−2 7レベルおよび疾患重症度スコア(MELD、MELD−N AおよびCLIF−C ACLF)とROC曲線により比較した(図5、表2)。 IgGレベルのROC曲線下面積(AUC)は0.752(95%信頼区間:0.562〜0.891)であった。 興味深いことに、IgGレベルを用いて得られたAUC値と、IL-27レベル(0.824,)、MELDスコア(0.870,)、MELD-Naスコア(0.854,)、またはCLIF-C ACLFスコア(0.671,)で得られたAUC値との間には有意差は存在せず、IgGレベルがこれらのパラメータと同等の予後値を有し得ることを示している。

4. 議論

これまで、HBV-ACLF患者における血清免疫グロブリンの役割およびIL-27との相関については、あまり情報が得られていない。 HBV-ACLF群ではchb群よりも免疫グロブリンレベルが上昇した患者が多く,免疫グロブリン(Igg,Iga,Igm)レベルは肝損傷と正の関連があった。 さらに、Iggレベルは、MELDスコア(、)と積極的に関連しており、HBV−ACLF患者におけるROC曲線(、)を用いて3ヶ月の死亡率を予測することができる。 さらに、本研究は、Iggレベルが、HBV−ACLF(、)患者におけるIL−2 7の発現と正の相関があり、IL−2 7がIggの産生に関与し得ることを示すことを示している。

これまでの研究では、自己免疫性肝炎(IgGの上昇)、PBC(IgMの上昇)、アルコール性肝疾患および非アルコール性脂肪肝疾患(IgAの上昇)などのいくつかのタイプの肝 しかし、HBV-ACLF患者で血清免疫グロブリンレベルがどのように変化するかについてはほとんど知られていない。 本研究では、83.3%のHBV-ACLF患者はIgGが上昇していた(>1ULN)が、46であった。7%の患者は上昇したIgA(>1ULN)を有し、50%の患者は上昇したIgM(>1ULN)を有した。 これらのデータは、HBV-ACLF患者の特徴であり得る免疫グロブリンのポリクローナル増加を示している。 したがって、肝疾患の疑いのある患者を調査する際に、免疫グロブリンのポリクローナル増加の発見は、自己免疫性肝疾患の証拠がなく、過剰なアルコール消費の病歴がない場合に、臨床医にHBV-ACLFを診断として考慮するよう促すべきである。

Tリンパ球は、HBV-ACLFの病因において重要な役割を果たすことが証明されている。

Tリンパ球は、HBV-ACLFの病因において重要な役割を果た しかし、Bリンパ球に関する研究は限られている。 また、HBV-ACLF患者における免疫グロブリンの役割はあまり理解されていない。 肝組織を用いた最近の研究では、bリンパ球を介した応答は、慢性B型肝炎患者の免疫寛容および免疫活性期に非常に活性であることが示された。 さらに,圧倒的なB細胞応答が見られ,hbv関連急性肝不全患者の肝実質に形質細胞による免疫グロブリンの大量産生が沈着することが分かった。 これらの研究は、B細胞によって産生される免疫グロブリンがHBV-ACLFにおける肝損傷に寄与する可能性があるという仮説を導いた。 この概念を支持する証拠のいくつかの行があります。 まず、HBV−ACLF患者は、CHB患者および正常対照と比較して、より高い血清Igg、Iga、およびIgmレベルを有していたことを示す。 さらに,hbv感染患者の血清Igg,Iga,およびIgmレベルは血清Tbilレベルと正の相関を示したが,ptaレベルおよびALBレベルと負の相関を示し,肝損傷のマーカーとなることが多かった。 さらに,IggレベルはHBV-ACLFにおける疾患重症度の重要な指標であるMELDスコアと正の相関を示した。 また,Iggレベルは生存患者よりも非生存者のHBV-ACLF患者で有意に高かった。 さらに、ROC曲線分析は、IggレベルがHBV−ACLF(、)を有する患者における3ヶ月の死亡率を正確に予測することを示した。 IggはHBV-ACLFの病因に重要な役割を果たしており,Iggのレベルが高いほど予後不良を予測することが示唆された。

免疫応答のメディエーターとして機能するサイトカインは、免疫媒介性疾患のメカニズムに不可欠な役割を果たしています。 IL-27、IL-27p28とEBI3サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインは、サイトカインのIL-6/IL-12ファミリーのメンバーであり、免疫応答の間に炎症誘発性およ B細胞は完全なIL−2 7Rを発現し、これはヒトナイーブB細胞、記憶B細胞、および静止形質細胞上で検出することができる。 さらに重要なことに、IL-27は、B細胞に対する直接的および間接的な影響の両方を介して抗体駆動型自己免疫疾患を支持することが証明されているが、別の報告では、IL-27が白血病B細胞の増殖を直接阻害することが明らかにされている。 今日まで、HBV-ACLF患者における免疫グロブリンの発現に対するIL-27の役割についてはあまり知られていない。 我々の知る限りでは、現在の研究は、HBV-ACLFにおけるIL-27発現と免疫グロブリンとの間の相関を調べるための最初のものです。 我々の以前の報告によれば、IL-27レベルは、本研究におけるCHB群およびNC群よりもHBV-ACLF患者において有意に増加することが見出された。 次に、hbv感染患者では、免疫グロブリンが血清IL-27レベルと正の相関を示すことを示しました(図4)。 さらに重要なことに、Iggレベルは、IL−2 7レベル(、)と正の関連があり、Hbv−ACLF患者において、IgmレベルとIL−2 7レベル(、)との間の正の傾向が見出された。 総称して、これらのデータは、優先上昇免疫グロブリンが密接にIL-27レベルとリンクされていたことを示しています。 IL-27はHBV-ACLFにおけるIgGの産生に関与する可能性があるが、正確なメカニズムは激しく検討されるべきであり、さらなる研究が必要である。この研究にはいくつかの制限があります。

肝生検の禁忌と考えられる凝固不良のため,hbv-ACLF患者では免疫グロブリンの肝内発現は決定されなかった。 また、HBV-ACLF患者におけるBリンパ球による免疫グロブリンの産生に対するIL-27の直接的な影響を調査するためには、さらなる研究が必要である。 さらに、この研究は限られたサンプルサイズで遡及的であったため、結果はより大きな研究でさらに検証されるべきである。

要約すると、我々の知見は、免疫グロブリンのポリクローナル増加が存在し、HBV-ACLF患者の肝損傷と密接に関連していたことを示している。 さらに、免疫グロブリンレベルは、IL-27レベルと正の相関があり、IL-27が免疫グロブリンの発現を誘導するのに役立つことを示唆していた。 さらに,Iggレベルが高いほど,hbv-ACLFの予後不良を予測することができた。 従って、他の臨床特徴および生化学的な結果と共に、血清IgGのレベルの査定は医者が危険度が高いHBV-ACLFの患者をより早く識別するのを助けることがで

Abbreviations

ACLF: Acute-on-chronic liver failure
CHB: Chronic hepatitis B
NC: Normal control
HBV: Hepatitis B virus
Tbil: Total bilirubin
PTA: Prothrombin time activity
MELD: Model for end-stage liver disease
CLIF-C: Chronic Liver Failure Consortium
IgG: Immunoglobulin G
IgA:/td> 免疫グロブリンA
IgM: 免疫グロブリンM
IL-27: インターロイキン-27
ULN: 正常の上限。

データの可用性

現在の研究中に使用または分析されたデータは、合理的な要求に応じて最初の著者(Geng-lin Zhang)から入手できます。

利益相反

著者らは、この作業に利益相反は報告していません。

著者の貢献

Geng-lin ZhangとQi-yi Zhaoはこの作品にも同様に貢献しました。

謝辞

この研究は、国家科学技術主要プロジェクト(2018ZX10302204-002)、中国国家自然科学財団(81672701)、広東省医学研究(A2017048)、広州科学技術プロジェクト(201508020118および2014Y2-00544)からの助成金

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