dit rapport beschrijft het ontstaan van LBCL bij een hond met pre-existent en persistent TZL. In de menselijke oncologie wordt de aanwezigheid van twee verschillende, klonaal ongerelateerde lymfomen binnen hetzelfde orgaan “samengesteld lymfoom”genoemd. Deze entiteit omvat < 5% van alle lymfomen bij de mens , maar is niet eerder gemeld bij honden. De diagnose van samengesteld lymfoom vereist morfologische, immunohistochemische en moleculaire beoordeling . In het hier gerapporteerde geval was deze diagnose gebaseerd op de ongelijksoortige cytomorfologische en immunofenotypische kenmerken van de tumoren evenals de twee verschillende klonale handtekeningen bepaald door op NGS gebaseerde clonaliteitstesten. Transformatie van indolente hematologische neoplasmata in agressievere vormen, zoals chronische lymfatische leukemie in hoogwaardig lymfoom, is eerder gemeld, en lijkt af en toe voor te komen bij honden . Echter, in dit geval, het gecombineerde bewijs van meerdere testmodaliteiten sterk suggereert de samenloop van twee verschillende lymfomen in plaats van de evolutie van een indolent lymfoom in een meer agressieve variant.
Het onderscheiden van recidief ten opzichte van de ontwikkeling van een de novo tumor is een uitdaging voor de meeste kankertypes. Lymfoïde kanker verschillen in dit opzicht omdat elke lymfocyt kloon draagt een unieke DNA-sequentie die kan worden gebruikt als een genetische vingerafdruk om lymfocyt klonen te volgen in de tijd en over anatomische plaatsen. Deze unieke genopeenvolging wordt gegenereerd vroeg in lymfocytenontwikkeling door herschikking van antigeenreceptorgenen, en verleent elke lymfocyt kloon met unieke antigeenspecificiteit. Clonaliteitstesten beoordelen de diversiteit van lymfocyten antigeenreceptorgenen in een bepaalde lymfocytenpopulatie. In de aanvankelijke steekproef, bevestigde het testen van clonality de diagnose van TZL die op de aanwezigheid van clonal TRB en Trg herschikkingen wordt gebaseerd. Een enkele productieve TRB-herschikking en twee onproductieve TRG–herschikkingen waren consistent met een alfa/beta t-cellijn van de neoplastische kloon, en het gebruik van TRGV2/TRJ3-2 door beide dominante klonen suggereerde eerder een bi-allelische herschikking dan de herschikking van twee verschillende cassettes op hetzelfde chromosoom. De zelfde herschikkingen werden gevonden in de tweede steekproef bij gelijkaardige overvloed, die persistentie van de neoplastic t celkloon in het gezicht van behandeling voorstelt. Naast de clonale TRB en TRG herschikkingen, toonde de tweede steekproef een dominante IGH kloon die ongeveer 88% van alle herschikkingen omvatte. Deze bevinding bevestigt niet alleen de diagnose van een B-cellymfoom, maar stelt ook voor dat het B-cellymfoom eerder een de novo tumor dan een progressie van TZL met veranderd immunophenotype is. In tegenstelling tot de telleruitdrukking van de celoppervlakte, die door micro-milieustimuli en het ontwikkelingsstadium en de levensvatbaarheid van een cel kan worden beà nvloed, zijn de herschikkingen van het het gengen van de lymfocytenantigereceptor stabiel gedurende het leven van een lymfocyt . Bijgevolg, als de B-cellymfoom was een getransformeerde progressie van de eerder gediagnosticeerde TZL, dan de dominante IGH kloon ontdekt in de tweede steekproef zou hebben moeten aanwezig zijn in de eerste steekproef. Nochtans, had de aanvankelijke steekproef een divers polyclonal B-celrepertoire, en de opeenvolging van de clonale herschikking IGH werd niet ontdekt in de aanvankelijke steekproef.
het gebruik van op sequencing gebaseerde clonaliteitstesten leverde een duidelijk voordeel op ten opzichte van op elektroforese gebaseerde methoden. Traditioneel, gebruikt het testen van clonality gelelektroforese om de diversiteit van de regelingen van het het gen van de lymfocytenantigereceptor in een bepaalde steekproef te visualiseren. Aangezien deze methode slechts antigeenreceptorgenen door Grootte onderscheidt, kan het in twijfelachtige resultaten resulteren wanneer het signaal van een neoplastische kloon door lawaai van niet-neoplastische lymfocyten wordt gedoofd. Het rangschikken-gebaseerde clonaliteitstests levert een hogere ‘klonale resolutie’ op omdat het lymfocyt klonen kan onderscheiden die op opeenvolging bovenop grootte worden gebaseerd . In deze studie, het rangschikken-gebaseerd testen identificeerde gemakkelijk TRB en TRG klonen in beide steekproeven ondanks de aanwezigheid van een polyclonal achtergrond. Verder werd door de identificatie van de TRB-en TRG-gensequenties van de neoplastische kloon ondubbelzinnig vastgesteld dat de dominante t-celkloon in beide monsters identiek was. Het identificeren van klonen door gensequentie geeft een hoger vertrouwen in beide klonen die identiek zijn dan wanneer klonen alleen door Grootte worden geà dentificeerd. Een ander voordeel van NGS-gebaseerde clonaliteit testen is dat zodra de sequentie van een neoplastische kloon is bepaald, het kan worden getraceerd in monsters, zelfs als het bestaat uit een minieme fractie van alle herschikkingen . In het huidige geval maakte de identificatie van de IGH-gensequentie van de LBCL in het tweede monster het zoeken naar deze ‘indexsequentie’ in het eerste monster mogelijk. Het feit dat de IGH indexsequentie niet kon worden gevonden in de eerste steekproef suggereert sterk dat deze B-cel kloon niet aanwezig was op het moment dat de Tzl aanvankelijk werd gediagnosticeerd. Van nota, is de gevoeligheid van het ontdekken van een indexkloon hoogst afhankelijk van het rangschikken van diepte.
hoewel NGS in dit geval nuttig was om de aanwezigheid van twee verschillende klonen te identificeren, waren andere diagnostische benaderingen ook noodzakelijk. Een hele aangetaste lymfeklieren werd aanvankelijk verwijderd en histopathologisch en immunohistochemisch beoordeeld om de cytologische diagnose van TZL te bevestigen. De secties bestonden uit een homogene populatie van kleine lymfocyten met zeldzame restjes follikels. Cytologische evaluatie van een aspiraat van de contralaterale popliteale lymfeklier verzameld 1 jaar na het eerste monster geïdentificeerd cellen morfologisch consistent met LBCL in plaats van TZL, die immunofenotypische beoordeling gevraagd. Flow cytometrie bevestigd LBCL, die in vrijwel alle gevallen bij honden is een DLBCL . Hoewel histopathologische beoordeling van de aangetaste lymfeklieren niet werd uitgevoerd, waren de flowcytometrische bevindingen van de positiviteit van CD21, CD45 en MHC II in combinatie met de grootte van grote cellen in hoge mate consistent met de diagnose van DLBCL . Onder lymfomen bij honden, TZL is een unieke entiteit, omdat zelfs zonder therapie het neoplasma kan niet vooruitgang op alle of slechts langzaam; er is een sterke ras voorkeur; de pan-leukocyten antigeen CD45 is meestal niet op te sporen op tumorcellen; en de B-cel antigeen CD21 kan aanwezig zijn op laag niveau . Bovendien, cellen met dit immunofenotype zijn geïdentificeerd in oudere Golden Retriever honden zonder bewijs van lymfoïde neoplasie, en sommige van deze honden werden ook gemeld dat clonale T-cel populaties. Van nota, is de resolutie van klonale pieken met elektroforese-gebaseerde methodes lager dan met het rangschikken-gebaseerde methodes, en het is denkbaar dat de klonale die populaties door elektroforese worden geà dentificeerd meer divers kunnen zijn als beoordeeld door te rangschikken. Daarom blijven veel aspecten van de biologie van TZL onvolledig gekarakteriseerd.
het is mogelijk dat de hond in dit rapport een verhoogd risico had op het ontwikkelen van secundaire neoplasmata na bestraling van de hersentumor. Radiotherapie induceert een veelheid aan bijwerkingen, waaronder systemische effecten van lokale therapie . Dergelijke effecten kunnen het immuunsysteem in gevaar brengen, wat op zijn beurt immuunbewaking kan verminderen en het risico op verdere ontwikkeling van kanker kan verhogen. Terwijl bij de mens tumor bestraling wordt meestal geassocieerd met secundaire myeloïde neoplasmata, soortgelijke associaties bij honden zijn onbepaald . In het algemeen, kennis van genetische laesies onderliggende lymfomagenese bij honden is schaars, en een beperkte set van mutaties was meer sterk geassocieerd met ras dan met lymfoom type .
behandeling en prognose van samengesteld lymfoom bij de mens varieert afhankelijk van het histologische subtype . Canine TZL heeft een indolent ziekteverloop, maar DLBCL is een agressief lymfoom met een mediane progressievrije overleving van 251-252 dagen, wanneer behandeld met gecombineerde chemotherapie . Inductietherapie voor de hond in dit rapport was een standaarddosis L-asparaginase en vincristine, maar een duurzame klinische respons werd niet verwacht vanwege de voorafgaande langdurige blootstelling aan glucocorticoïden . Helaas, ondanks een aanvankelijk gunstige respons, werd de therapie niet voortgezet en kon het resultaat niet volledig worden beoordeeld.
de patiënt was gediagnosticeerd met een intracraniële massa die het meest overeenkomt met glioom enkele maanden voorafgaand aan de eerste diagnose van lymfoom. Zonder histopathologische evaluatie kunnen niet-neoplastische oorzaken van hersenmassa ‘ s zoals vasculaire gebeurtenissen of granulomateuze ontsteking niet volledig worden uitgesloten. De klinische kenmerken en MRI-kenmerken van intra-axiale locatie, T2/FLAIR hyperintensiteit, T1 hypointensiteit, gebrek aan contrastversterking en Massa-effect, wezen echter het meest op een neoplasma zoals een laaggradig glioom . Definitieve bestralingstherapie resulteerde in ten minste 16 maanden objectieve tumorrespons bij deze patiënt, die gelijkaardig of iets langer is dan gerapporteerd voor andere intra-axiale tumoren .
Beperkingen van dit onderzoek waren de onbeschikbaarheid van een biopsie van de lymfeklier met gelijktijdig TZL/LBCL, en het ontbreken van post mortem beoordeling. Histopathologie en immunohistochemie van het tweede lymfoom zou hebben toegestaan meer definitieve diagnose van LBCL, en geïllustreerde morfologische bevindingen geassocieerd met gelijktijdige TZL en LBCL. Op dezelfde manier, post mortem evaluatie zou hebben toegestaan sluitende identificatie van de hersenlaesie en de omvang van het lymfoom. Niettemin, bewijs voor een samengestelde lymfoom in dit geval werd beschouwd als zeer sterk op basis van meerdere geavanceerde en complementaire diagnostische benaderingen.
concluderend, dit rapport van een samengesteld lymfoom bij een hond benadrukt de waarde van meerdere diagnostische benaderingen om onderscheid te maken tussen twee de novo lymfomen in plaats van transformatie van een enkele kloon.