denna rapport beskriver uppkomsten av LBCL hos en hund med existerande och ihållande TZL. I human onkologi, närvaron av två distinkta, klonalt orelaterade, lymfom inom samma organ kallas ”sammansatt lymfom”. Denna enhet omfattar < 5% av alla lymfom hos människa , men har inte tidigare rapporterats hos hundar. Diagnosen av sammansatt lymfom kräver morfologisk, immunhistokemisk och molekylär bedömning . I det fall som rapporterats här baserades denna diagnos på de olika cytomorfologiska och immunofenotypiska egenskaperna hos tumörerna såväl som de två distinkta klonala signaturerna bestämda av NGS-baserad klonalitetstestning. Omvandling av indolenta hematologiska neoplasmer till mer aggressiva former, såsom kronisk lymfocytisk leukemi till höggradigt lymfom, har tidigare rapporterats och verkar förekomma ibland hos hundar . I detta fall tyder dock det kombinerade beviset på flera testmetoder starkt på att två distinkta lymfom sammanfaller snarare än utvecklingen av ett indolent lymfom till en mer aggressiv variant.
att skilja återfall från utveckling av en de novo-tumör är utmanande för de flesta cancertyper. Lymfoidcancer skiljer sig åt i detta avseende eftersom varje lymfocytklon bär en unik DNA-sekvens som kan användas som ett genetiskt fingeravtryck för att spåra lymfocytkloner över tid och över anatomiska platser. Denna unika gensekvens genereras tidigt i lymfocytutveckling genom omarrangemang av antigenreceptorgener och ger varje lymfocytklon unik antigenspecificitet. Klonalitetstestning bedömer mångfalden av lymfocytantigenreceptorgener i en given lymfocytpopulation. I det initiala provet bekräftade klonalitetstestning diagnosen TZL baserat på närvaron av klonala TRB-och TRG-omarrangemang. En enda produktiv TRB-omläggning och två oproduktiva TRG–omarrangemang överensstämde med en alfa/beta-t-celllinje av den neoplastiska klonen, och användning av TRGV2/TRJ3-2 av båda dominerande klonerna tyder på en bi-allelisk omläggning snarare än omarrangering av två olika kassetter på samma kromosom. Samma omarrangemang hittades i det andra provet vid liknande överflöd, vilket antyder persistens av den neoplastiska t-cellklonen inför behandlingen. Förutom de klonala TRB-och TRG-omarrangemangen visade det andra provet en dominerande IGH-klon som omfattade cirka 88% av alla omarrangemang. Detta resultat bekräftar inte bara diagnosen av ett B-celllymfom utan antyder också att B-celllymfom är en de novo-tumör snarare än en progression av TZL med förändrad immunofenotyp. I motsats till cellytmarköruttryck, som kan påverkas av mikro-miljö stimuli och en Cells utvecklingsstadium och livskraft, är lymfocytantigenreceptorgenarrangemang stabila under hela en lymfocyts livstid . Följaktligen, om B-celllymfom hade varit en transformerad progression av den tidigare diagnostiserade TZL, skulle den dominerande IGH-klonen som detekterades i det andra provet ha varit tvungen att vara närvarande i det initiala provet. Det initiala provet hade emellertid en mångsidig polyklonal B-cellrepertoar, och sekvensen för den klonala IGH-omarrangemanget detekterades inte i det initiala provet.
användningen av sekvenseringsbaserad klonalitetstestning gav en distinkt fördel jämfört med elektroforesbaserade metoder. Traditionellt använder klonalitetstestning gelelektrofores för att visualisera mångfalden av lymfocytantigenreceptorgenarrangemang i ett givet prov. Eftersom denna metod endast skiljer antigenreceptorgener efter storlek kan det resultera i tvetydiga resultat när signalen från en neoplastisk klon släckes av brus från icke-neoplastiska lymfocyter. Sekvenseringsbaserad klonalitetstestning ger en högre ’klonal upplösning’ eftersom den kan skilja lymfocytkloner baserat på sekvens ovanpå storleken . I denna studie identifierade sekvenseringsbaserad testning lätt TRB-och TRG-kloner i båda proverna trots närvaron av en polyklonal bakgrund. Vidare fastställde identifieringen av TRB-och TRG-gensekvenserna av den neoplastiska klonen otvetydigt att den dominerande t-cellklonen var identisk i båda proverna. Att identifiera kloner genom gensekvens ger ett högre förtroende för att båda klonerna är identiska än om kloner endast identifieras efter storlek. En annan fördel med NGS-baserad klonalitetstestning är att när sekvensen av en neoplastisk klon har bestämts kan den spåras i prover även om den innefattar en minutfraktion av alla omarrangemang . I det aktuella fallet möjliggjorde identifiering av IGH-gensekvensen för LBCL i det andra provet sökning efter denna ’indexsekvens’ i det ursprungliga provet. Det faktum att IGH-indexsekvensen inte kunde hittas i det initiala provet tyder starkt på att denna b-cellklon inte var närvarande vid den tidpunkt då TZL ursprungligen diagnostiserades. Observera att känsligheten för att detektera en indexklon är mycket beroende av sekvenseringsdjupet.
Även om NGS var användbart för att identifiera närvaron av två distinkta kloner i detta fall var andra diagnostiska metoder också nödvändiga. En hel påverkad lymfkörtel avlägsnades initialt och bedömdes histopatologiskt och immunhistokemiskt för att bekräfta den cytologiska diagnosen TZL. Sektioner bestod av en homogen population av små lymfocyter med sällsynta restfolliklar. Cytologisk utvärdering av ett aspirat av den kontralaterala popliteala lymfkörteln uppsamlades 1 år efter det initiala provet identifierade celler morfologiskt förenliga med LBCL snarare än TZL, vilket föranledde immunofenotypisk bedömning. Flödescytometri bekräftade LBCL, som i praktiskt taget alla fall hos hundar är en DLBCL . Även om histopatologisk bedömning av den drabbade lymfkörteln inte utfördes, var flödescytometriska fynd av CD21, CD45 och MHC II-positivitet kombinerat med stor cellstorlek mycket förenlig med diagnosen DLBCL . Bland lymfom hos hundar är TZL en unik enhet eftersom även utan terapi kan neoplasmen inte utvecklas alls eller bara långsamt; det finns en stark rasförkärlek; pan-leukocytantigenet CD45 är vanligtvis odetekterbart på tumörceller; och B-cellantigenet CD21 kan vara närvarande vid låg nivå . Dessutom har celler med denna immunofenotyp identifierats hos äldre Golden Retrieverhundar utan bevis på lymfoid neoplasi, och några av dessa hundar rapporterades också ha klonala t-cellpopulationer . Observera att upplösningen av klonala toppar med elektroforesbaserade metoder är lägre än med sekvenseringsbaserade metoder, och det är tänkbart att klonpopulationer identifierade genom elektrofores kan vara mer olika om de bedöms genom sekvensering. Därför förblir många aspekter av tzl: s biologi ofullständigt karakteriserade.
det är möjligt att hunden i denna rapport hade en ökad risk att utveckla sekundära neoplasmer efter strålning av hjärntumören. Strålbehandling inducerar en mängd biverkningar, inklusive systemiska effekter från lokal terapi . Sådana effekter kan äventyra immunsystemet, vilket i sin tur kan minska immunövervakningen och öka risken för efterföljande cancerutveckling. Medan tumörbestrålning hos människor oftast är förknippad med sekundära myeloida neoplasmer, är liknande föreningar hos hundar obestämda . I allmänhet är kunskap om genetiska lesioner som ligger bakom lymfomagenes hos hundar gles, och en begränsad uppsättning mutationer var mer starkt associerad med ras än med lymfomtyp .
behandling och prognos för sammansatt lymfom hos människor varierar beroende på histologisk subtyp . Canine TZL har en indolent sjukdomsförlopp, men DLBCL är ett aggressivt lymfom med median progressionsfri överlevnad på 251-252 dagar, när det behandlas med kombinationskemoterapi . Induktionsterapi för hunden i denna rapport var en standarddos av L-asparaginas och vinkristin, men ett varaktigt kliniskt svar förväntades inte på grund av tidigare långvarig exponering för glukokortikoider . Tyvärr, trots ett initialt gynnsamt svar, fortsatte behandlingen inte, och resultatet kunde inte bedömas fullständigt.
patienten hade diagnostiserats med en intrakraniell massa som mest överensstämde med gliom flera månader före den första diagnosen lymfom. Utan histopatologisk utvärdering kan icke-neoplastiska orsaker till hjärnmassor såsom vaskulära händelser eller granulomatös inflammation inte helt uteslutas. De kliniska egenskaperna och Mr-egenskaperna hos intra-axiell plats, T2/FLAIR hyperintensitet, T1 hypointensitet, brist på kontrastförbättring och Masseffekt var dock mest suggestiva för en neoplasma såsom ett lågkvalitativt gliom . Definitiv strålbehandling resulterade i minst 16 månaders objektivt tumörrespons hos denna patient, vilket är liknande eller något längre än rapporterat för andra intra-axiella tumörer .
Begränsningar för denna undersökning var otillgängligheten av en biopsi från lymfkörteln med samtidig TZL/LBCL och brist på bedömning efter mortem. Histopatologi och immunhistokemi av det andra lymfomet skulle ha tillåtit mer definitiv diagnos av LBCL och illustrerade morfologiska fynd associerade med samtidig TZL och LBCL. På samma sätt skulle utvärdering efter mortem ha möjliggjort avgörande identifiering av hjärnskadorna och omfattningen av lymfom. Icke desto mindre ansågs bevis för ett sammansatt lymfom i detta fall vara mycket starkt baserat på flera sofistikerade och komplementära diagnostiska metoder.Sammanfattningsvis framhäver denna rapport av ett sammansatt lymfom hos en hund värdet av flera diagnostiska metoder för att skilja mellan två de novo lymfom snarare än transformation av en enda klon.