Dieser Bericht beschreibt das Auftreten von LBCL bei einem Hund mit vorbestehendem und persistierendem TZL. In der menschlichen Onkologie wird das Vorhandensein von zwei verschiedenen, klonal nicht verwandten Lymphomen innerhalb desselben Organs als „zusammengesetztes Lymphom“ bezeichnet. Diese Entität umfasst < 5% aller Lymphome beim Menschen , wurde jedoch bisher nicht bei Hunden berichtet. Die Diagnose eines zusammengesetzten Lymphoms erfordert eine morphologische, immunhistochemische und molekulare Beurteilung . In dem hier berichteten Fall basierte diese Diagnose auf den unterschiedlichen zytomorphologischen und immunphänotypischen Merkmalen der Tumoren sowie auf den beiden unterschiedlichen klonalen Signaturen, die durch NGS-basierte Klonalitätstests bestimmt wurden. Die Umwandlung von indolenten hämatologischen Neoplasmen in aggressivere Formen, wie chronische lymphatische Leukämie in hochgradige Lymphome, wurde bereits berichtet und scheint gelegentlich bei Hunden aufzutreten . In diesem Fall deutet der kombinierte Nachweis mehrerer Testmodalitäten jedoch eher auf das Zusammenfallen von zwei verschiedenen Lymphomen als auf die Entwicklung eines indolenten Lymphoms zu einer aggressiveren Variante hin.Die Unterscheidung zwischen Rückfall und Entwicklung eines De-Novo-Tumors ist für die meisten Krebsarten eine Herausforderung. Lymphatische Krebserkrankungen unterscheiden sich in dieser Hinsicht, da jeder Lymphozytenklon eine einzigartige DNA-Sequenz trägt, die als genetischer Fingerabdruck verwendet werden kann, um Lymphozytenklone im Laufe der Zeit und über anatomische Stellen hinweg zu verfolgen. Diese einzigartige Gensequenz wird früh in der Lymphozytenentwicklung durch Umlagerung von Antigenrezeptorgenen erzeugt und verleiht jedem Lymphozytenklon eine einzigartige Antigenspezifität. Klonalitätstests bewerten die Vielfalt der Lymphozyten-Antigen-Rezeptor-Gene in einer bestimmten Lymphozyten-Population. In der ersten Stichprobe bestätigten Klonalitätstests die Diagnose von TZL basierend auf dem Vorhandensein klonaler TRB- und TRG-Umlagerungen. Eine einzelne produktive TRB-Umlagerung und zwei unproduktive TRG–Umlagerungen stimmten mit einer Alpha / Beta-T-Zell-Linie des neoplastischen Klons überein, und die Verwendung von TRGV2 / TRJ3-2 durch beide dominanten Klone deutete eher auf eine biallelische Umlagerung als auf die Umlagerung von zwei verschiedene Kassetten auf demselben Chromosom. Die gleichen Umlagerungen wurden in der zweiten Probe in ähnlicher Häufigkeit gefunden, was auf eine Persistenz des neoplastischen T-Zellklons angesichts der Behandlung hindeutet. Zusätzlich zu den klonalen TRB- und TRG-Umlagerungen zeigte die zweite Probe einen dominanten IGH-Klon, der etwa 88% aller Umlagerungen umfasste. Dieser Befund bestätigt nicht nur die Diagnose eines B-Zell-Lymphoms, sondern legt auch nahe, dass das B-Zell-Lymphom eher ein De-novo-Tumor als ein Fortschreiten des TZL mit verändertem Immunphänotyp ist. Im Gegensatz zur Expression von Zelloberflächenmarkern, die durch Mikroumweltreize und das Entwicklungsstadium und die Lebensfähigkeit einer Zelle beeinflusst werden können, sind Lymphozyten-Antigen-Rezeptor-Genumlagerungen während der gesamten Lebensdauer eines Lymphozyten stabil . Wenn das B-Zell-Lymphom eine transformierte Progression des zuvor diagnostizierten TZL gewesen wäre, hätte folglich der dominante IGH-Klon, der in der zweiten Probe nachgewiesen wurde, in der Anfangsprobe vorhanden sein müssen. Die Ausgangsprobe wies jedoch ein vielfältiges polyklonales B-Zell-Repertoire auf, und die Sequenz der klonalen IGH-Umlagerung wurde in der Ausgangsprobe nicht nachgewiesen.
Die Verwendung von sequenzierungsbasierten Klonalitätstests bot einen deutlichen Vorteil gegenüber Elektrophorese-basierten Methoden. Traditionell verwendet der Klonalitätstest die Gelelektrophorese, um die Vielfalt der Lymphozyten-Antigen-Rezeptor-Genanordnungen in einer bestimmten Probe zu visualisieren. Da diese Methode nur Antigenrezeptorgene nach Größe unterscheidet, kann es zu zweideutigen Ergebnissen kommen, wenn das Signal eines neoplastischen Klons durch Rauschen nicht-neoplastischer Lymphozyten gelöscht wird. Sequenzierungsbasierte Klonalitätstests ergeben eine höhere ‚klonale Auflösung‘, da sie Lymphozytenklone basierend auf der Sequenz und der Größe unterscheiden können . In dieser Studie identifizierten sequenzierungsbasierte Tests in beiden Proben trotz des Vorhandenseins eines polyklonalen Hintergrunds leicht TRB- und TRG-Klone. Darüber hinaus wurde durch die Identifizierung der TRB- und TRG-Gensequenzen des neoplastischen Klons eindeutig festgestellt, dass der dominante T-Zellklon in beiden Proben identisch war. Die Identifizierung von Klonen anhand der Gensequenz verleiht eine höhere Sicherheit, dass beide Klone identisch sind, als wenn Klone nur anhand der Größe identifiziert werden. Ein weiterer Vorteil des NGS-basierten Klonalitätstests besteht darin, dass die Sequenz eines neoplastischen Klons nach der Bestimmung in Proben zurückverfolgt werden kann, selbst wenn er einen winzigen Bruchteil aller Umlagerungen umfasst . Im aktuellen Fall ermöglichte die Identifizierung der IGH-Gensequenz der LBCL in der zweiten Probe die Suche nach dieser ‚Indexsequenz‘ in der Anfangsprobe. Die Tatsache, dass die IGH-Indexsequenz in der Anfangsprobe nicht gefunden werden konnte, deutet stark darauf hin, dass dieser B-Zellklon zum Zeitpunkt der anfänglichen Diagnose der TZL nicht vorhanden war. Bemerkenswert ist, dass die Sensitivität der Erkennung eines Indexklons stark von der Sequenzierungstiefe abhängt.
Obwohl NGS in diesem Fall nützlich war, um das Vorhandensein von zwei verschiedenen Klonen zu identifizieren, waren auch andere diagnostische Ansätze notwendig. Ein ganzer betroffener Lymphknoten wurde zunächst entfernt und histopathologisch und immunhistochemisch untersucht, um die zytologische Diagnose von TZL zu bestätigen. Die Abschnitte bestanden aus einer homogenen Population kleiner Lymphozyten mit seltenen Follikelresten. Zytologische Bewertung eines Aspirats des kontralateralen poplitealen Lymphknotens gesammelt 1 Jahr nach der ersten Probe identifizierten Zellen morphologisch konsistent mit LBCL anstelle von TZL, was zu einer immunphänotypischen Beurteilung führte. Durchflusszytometrie bestätigte LBCL, die in praktisch allen Fällen bei Hunden eine DLBCL ist . Obwohl keine histopathologische Beurteilung des betroffenen Lymphknotens durchgeführt wurde, stimmten die durchflusszytometrischen Befunde der CD21-, CD45- und MHC II-Positivität in Kombination mit einer großen Zellgröße in hohem Maße mit der Diagnose von DLBCL überein . Unter den Lymphomen bei Hunden ist TZL eine einzigartige Entität, da das Neoplasma auch ohne Therapie möglicherweise gar nicht oder nur langsam fortschreitet; Es gibt eine starke Rassenvorliebe; Das Pan-Leukozyten-Antigen CD45 ist typischerweise auf Tumorzellen nicht nachweisbar; und das B-Zell-Antigen CD21 kann auf niedrigem Niveau vorhanden sein . Darüber hinaus wurden Zellen mit diesem Immunphänotyp bei älteren Golden Retriever-Hunden ohne Anzeichen einer lymphoiden Neoplasie identifiziert, und einige dieser Hunde wiesen auch klonale T-Zellpopulationen auf . Bemerkenswert ist, dass die Auflösung klonaler Peaks mit elektrophoresebasierten Methoden geringer ist als mit sequenzierungsbasierten Methoden, und es ist denkbar, dass durch Elektrophorese identifizierte klonale Populationen vielfältiger sein können, wenn sie durch Sequenzierung bewertet werden. Daher bleiben viele Aspekte der Biologie von TZL unvollständig charakterisiert.
Es ist möglich, dass der Hund in diesem Bericht ein erhöhtes Risiko hatte, nach Bestrahlung des Hirntumors sekundäre Neoplasmen zu entwickeln. Die Strahlentherapie induziert eine Vielzahl von Nebenwirkungen, einschließlich systemischer Wirkungen durch lokale Therapie . Solche Effekte können das Immunsystem beeinträchtigen, was wiederum die Immunüberwachung verringern und das Risiko einer späteren Krebsentstehung erhöhen kann. Während beim Menschen die Tumorbestrahlung am häufigsten mit sekundären myeloischen Neoplasmen assoziiert ist, sind ähnliche Assoziationen bei Hunden unbestimmt . Im Allgemeinen ist das Wissen über genetische Läsionen, die der Lymphomagenese bei Hunden zugrunde liegen, spärlich, und eine begrenzte Anzahl von Mutationen war stärker mit der Rasse als mit dem Lymphomtyp assoziiert .
Die Behandlung und Prognose des Kompositlymphoms beim Menschen variiert je nach histologischem Subtyp . Canine TZL hat einen indolenten Krankheitsverlauf, aber DLBCL ist ein aggressives Lymphom mit einem medianen progressionsfreien Überleben von 251-252 Tagen, wenn es mit einer Kombinationschemotherapie behandelt wird . Die Induktionstherapie für den Hund in diesem Bericht war eine Standarddosis von L-Asparaginase und Vincristin, aber ein dauerhaftes klinisches Ansprechen war aufgrund der vorherigen Langzeitexposition mit Glukokortikoiden nicht zu erwarten . Leider wurde die Therapie trotz eines anfänglich günstigen Ansprechens nicht fortgesetzt, und das Ergebnis konnte nicht vollständig beurteilt werden.
Bei dem Patienten wurde einige Monate vor der ersten Diagnose eines Lymphoms eine intrakranielle Masse diagnostiziert, die am ehesten mit einem Gliom übereinstimmt. Ohne histopathologische Beurteilung können nicht-neoplastische Ursachen von Hirnmassen wie vaskuläre Ereignisse oder granulomatöse Entzündungen nicht vollständig ausgeschlossen werden. Die klinischen Merkmale und MRT-Merkmale der intraaxialen Lokalisation, der T2 / 2-Hyperintensität, der T1-Hypointensität, der fehlenden Kontrastverstärkung und des Masseneffekts deuteten jedoch am deutlichsten auf ein Neoplasma wie ein niedriggradiges Gliom hin . Die definitive Strahlentherapie führte bei diesem Patienten zu einer objektiven Tumorantwort von mindestens 16 Monaten, die ähnlich oder etwas länger ist als bei anderen intraaxialen Tumoren berichtet .Einschränkungen dieser Untersuchung waren die Nichtverfügbarkeit einer Biopsie aus dem Lymphknoten mit gleichzeitiger TZL / LBCL und das Fehlen einer Post-Mortem-Beurteilung. Histopathologie und Immunhistochemie des zweiten Lymphoms hätten eine definitivere Diagnose von LBCL ermöglicht und morphologische Befunde im Zusammenhang mit gleichzeitiger TZL und LBCL veranschaulicht. In ähnlicher Weise hätte die Post-Mortem-Auswertung eine schlüssige Identifizierung der Hirnläsion und des Ausmaßes des Lymphoms ermöglicht. Nichtsdestotrotz wurde die Evidenz für ein zusammengesetztes Lymphom in diesem Fall aufgrund mehrerer ausgefeilter und komplementärer diagnostischer Ansätze als sehr stark angesehen.Zusammenfassend unterstreicht dieser Bericht über ein zusammengesetztes Lymphom bei einem Hund den Wert mehrerer diagnostischer Ansätze zur Unterscheidung zwischen zwei De-novo-Lymphomen anstelle der Transformation eines einzelnen Klons.