Quantifizierung der Leukozyten-Linksverschiebung
Die frühesten morphologisch erkennbaren Neutrophilen-Typen sind Myeloblasten, Promyelozyten und Myelozyten. Diese Zellen reifen zu Metamyelozyten, dann zu Banden und schließlich zu segmentierten Neutrophilen (Abb. 7.4). Myeloblasten, Promyelozyten und Myelozyten sind zur Zellteilung fähig, was durch den Einbau von tritiiertem Thymidin in ihre Kern-DNA belegt und durch direkte Beobachtung in Kultur verifiziert wird.22,23 Diese drei frühen Stadien von Neutrophilen werden zusammen als neutrophiles mitotisches Kompartiment oder als neutrophiler proliferativer Pool bezeichnet. Während der Infektion fügt das neutrophile mitotische Kompartiment typischerweise eine oder zwei zusätzliche Zellteilungen hinzu, wodurch die proliferative Poolgröße erweitert wird.23 Das Hinzufügen einer weiteren Division verdoppelt die Anzahl der produzierten reifen Neutrophilen. Während der Infektion nimmt die Anzahl der Promyelozyten und Myelozyten im Knochenmark typischerweise aufgrund der zusätzlichen Zellteilungen zu.24
Neutrophile Left Shift ist ein Ausdruck, der verwendet wird, um einen abnormalen Anstieg von unreifen Neutrophilen im Kreislauf anzuzeigen.25-27 Eine Methode zur Quantifizierung der Linksverschiebung, insbesondere in der neonatalen Hämatologie, ist das Verhältnis von Unreifen zu gesamten (I / T) Neutrophilen.25-30 Ein Mechanismus zur Abgabe von mehr Neutrophilen an infizierte Gewebe ist die vorzeitige Freisetzung von unreifen postmitotischen Neutrophilen (Metamyelozyten und Bänder) aus dem Knochenmark in den Kreislauf. Dies führt zu einer Erhöhung des Verhältnisses.26,31-35
Das I/T-Neutrophilenverhältnis erfordert eine manuelle Differentialzellzählung; ein Hämatologietechnologe untersucht mikroskopisch 100 Leukozyten auf einem gefärbten Blutfilm und zählt jede Zelle nach morphologischen Merkmalen auf. Das I / T-Verhältnis wird typischerweise berechnet als die prozentualen Bandneutrophilen plus Metamyelozyten geteilt durch die prozentualen segmentierten Neutrophilen plus Bandneutrophilen plus Metamyelozyten. Eine zweite gängige Methode zur Quantifizierung der Linksverschiebung ist die absolute Bandzählung, die ebenfalls ein manuelles Differential erfordert. Der Prozentsatz der als Banden identifizierten Leukozyten wird mit der Leukozytenzahl multipliziert und der Wert als Banden / µl Blut ausgedrückt.36 Die Zuverlässigkeit des I / T-Verhältnisses wird durch die großen Interobserver-Unterschiede bei der Klassifizierung von Neutrophilen als Banden oder segmentierte Formen beeinflusst.29
Die automatisierte Leukozyten-Differentialzellzählung ist eine relativ neue Innovation in der klinischen Laborhämatologie; Eine große Anzahl von Leukozyten wird durch durchflusszytometrische Techniken nach ihrer Größe und ihren zytoplasmatischen und nuklearen Eigenschaften kategorisiert.4,28,37 Eine kleine Fraktion von Promyelozyten, Myelozyten und Metamyelozyten entweicht aus dem Knochenmark und befindet sich im Blut, und diese können mit bestimmten hämatologischen Analysegeräten gemessen werden. In einer automatisierten Differentialzellzählung bei einigen Modellen von Sysmex Hämatologie-Analysegeräten wird die Linksverschiebung durch unreife Granulozyten (IGs) quantifiziert. Diese Ergebnisse können als unreife Granulozytenzahl (IG%) oder absolute unreife Granulozytenzahl (IG / µL) angegeben werden. Das IG% und das IG / µL sind etwas analog, aber technisch verschieden von dem I / T-Neutrophilen-Verhältnis und der absoluten Bandenzahl. Automatisierte Differentiale haben den Vorteil, dass kein Blutausstrich oder die erforderliche Zeit für eine mikroskopische Analyse erforderlich ist.4,5 Darüber hinaus wurde eine verbesserte Leistung des automatisierten Differentials gegenüber manuellen Methoden von erwachsenen Populationen auf der Grundlage einer viel größeren Stichprobe aufgezählter Leukozyten berichtet. Außerdem werden menschliche Fehler bei der Unterscheidung zwischen Zelltypen beseitigt, da die Zelltypzuordnung automatisch durch voreingestellte Gating-Techniken bestimmt wird.38 Fig. 7.5 zeigt den Differentialkanal der weißen Blutkörperchen (WDF), der von Sysmex-Analysegeräten erzeugt wird.6
In vielen klinischen Labors haben automatisierte Differentialzählungen die manuelle Zählung für erwachsene Patienten ersetzt.5,39 Ein Hindernis für die Einführung automatisierter Leukozytendifferentiale in der Neonatologie war das Fehlen von Referenzintervallen für IG% und IG / µL in neonatalen Populationen.40 Auch die Nützlichkeit von IG% und IG / µL als Biomarker für Infektionen war nicht direkt mit dem I / T-Neutrophilen-Verhältnis und der absoluten Bandenzahl bei infizierten und nicht infizierten Neugeborenen verglichen worden.
Referenzintervalle (5. und 95. Perzentil untere und obere Grenze) für IG% und IG/µL wurden unter Verwendung der CBCs von Neugeborenen ohne Anzeichen einer Infektion entwickelt. Abb. 7.6 enthält Referenzintervalldiagramme für IG% und IG / µL für die erste Woche nach der Geburt.41
Die vier Methoden zur Quantifizierung der Linksverschiebung hatten eine ähnliche statistische Leistung, um die Diagnose einer Infektion vorzuschlagen (Tabelle 7.1). Für jede der vier war die Sensitivität schwach (12% -15%), während die Spezifität stark war (90% -95%), und der positive Vorhersagewert (PPV) und der negative Vorhersagewert (NPV) lagen typischerweise in den niedrigen bis mittleren 60er Jahren%. Kombinationen der vier neigten dazu, die Empfindlichkeit zu verringern, erhöhten jedoch den PPV.41
Das I/ T-Neutrophilenverhältnis ist keine empfindliche Methode zur Identifizierung einer Infektion, aber ein hoher Wert ist ziemlich spezifisch für eine Infektion. Die IG / µL- und Bandenzahlen zeigten eine ähnliche Leistung wie das I / T-Verhältnis und IG%. Diese Ergebnisse führten uns zu dem Schluss, dass für die meisten Zwecke ein automatisiertes Differential ebenso wie ein manuelles Differential dienen sollte, ähnlich wie Schlussfolgerungen aus CBCs von Erwachsenen.39,42 Darüber hinaus fanden wir drei manuelle Differentialzählungen, bei denen wir vermuteten, dass es sich um Transpositionsfehler handelte (Bänder in der seg-Spalte und umgekehrt). Diese Fälle hatten außergewöhnlich hohe I / T-Verhältnisse (>0, 8), aber die Patienten schienen gut zu sein, und wenn die CBCs sofort wiederholt wurden, waren die I / T-Verhältnisse normal (<0, 2). Solche Fehler würden bei automatisierten Differentialzählungen nicht auftreten.
Die CBC mit einem Leukozytendifferential ist einer der häufigsten Labortests, die bei Neugeborenen und Kleinkindern durchgeführt werden. Wir schließen daraus, dass zur Quantifizierung der Leukozyten-Linksverschiebung die IG% und IG / µL aus einer automatisierten Differentialzählung auf dem Sysmex Hematology Analyzer mit dem I / T-Verhältnis und der absoluten Bandenzahl vergleichbar sind basierend auf einer manuellen Differentialzählung, obwohl die IG- und I / T-Werte schlecht korrelieren. Automatisierte Differentialleukozyten, die andere Arten von Zellzählern verwenden, sollten ebenfalls mit manuellen Differentialzählungen verglichen werden. Wir schließen daraus, dass eine automatisierte Differentialzählung für die Neugeborenenmedizin ausreichen sollte. Bei ausgewählten Neugeborenen, bei denen die Identifizierung einer Infektion der Zweck der CBC ist, könnte das Hinzufügen einer manuellen Differentialzählung die Testleistung geringfügig verbessern.