tässä raportissa kuvataan LBCL: n ilmaantumista koiralla, jolla on ennalta olemassa oleva ja pysyvä TZL. Ihmisen onkologiassa esiintyy kaksi erillistä, kloonisesti toisiinsa liittymätöntä lymfoomaa samassa elimessä, jota kutsutaan”komposiittilymfoomaksi”. Tämä kokonaisuus käsittää < 5% kaikista lymfoomista ihmisillä , mutta sitä ei ole aiemmin raportoitu koirilla. Komposiittilymfooman diagnosointi edellyttää morfologista, immunohistokemiallista ja molekulaarista arviointia . Tässä raportoidussa tapauksessa tämä diagnoosi perustui kasvainten erilaiseen sytomorfologiseen ja immunofenotyyppiseen ominaisuuteen sekä kahteen erilliseen klooniseen allekirjoitukseen, jotka määritettiin NGS-pohjaisella kloonisuustestillä. Transformation veltto hematologic kasvaimet aggressiivisempia muotoja, kuten krooninen lymfaattinen leukemia osaksi high-grade lymfooma, on aiemmin raportoitu, ja näyttää esiintyvän satunnaisesti koirilla . Kuitenkin, tässä tapauksessa, yhdistetty näyttö useita testausmenetelmiä viittaa vahvasti kahden erillisen lymfoomien yhtäpitävyys sen sijaan kehitys veltto lymfooma aggressiivisempi variantti.
relapsin erottaminen de novo-kasvaimen kehittymisestä on haastavaa useimmille syöpätyypeille. Imusolmukesyövät eroavat toisistaan tässä suhteessa, koska jokaisella lymfosyyttikloonilla on yksilöllinen DNA-sekvenssi, jota voidaan käyttää geneettisenä sormenjälkenä lymfosyyttikloonien jäljittämiseen ajan mittaan ja anatomisilla alueilla. Tämä ainutlaatuinen geenisekvenssi syntyy varhaisessa vaiheessa lymfosyyttien kehitystä järjestämällä uudelleen antigeenireseptorigeenit, ja antaa jokaiselle lymfosyyttikloonille ainutlaatuisen antigeenispesifisyyden. Klonaalisuustestillä arvioidaan lymfosyyttien antigeenireseptorigeenien monimuotoisuutta tietyssä lymfosyyttipopulaatiossa. Ensimmäisessä näytteessä klonaalisuuden testaus vahvisti TZL: n diagnoosin kloonisen TRB: n ja TRG: n uudelleenjärjestelyjen perusteella. Yksi tuottava TRB: n uudelleenjärjestely ja kaksi tuottamatonta TRG: n uudelleenjärjestäytymistä olivat yhdenmukaisia neoplastisen kloonin alfa/beeta–t-solulinjan kanssa, ja trgv2/TRJ3-2: n käyttö molemmilla hallitsevilla klooneilla viittasi kaksialleeliseen uudelleenjärjestelyyn eikä kahden eri kasetin uudelleenjärjestelyyn samassa kromosomissa. Sama uudelleenjärjestyminen havaittiin toisessa näytteessä yhtä runsaana, mikä viittaa neoplastisen t-solukloonin pysyvyyteen hoidon aikana. Kloonisten TRB-ja TRG-uudelleenjärjestelyjen lisäksi toisessa näytteessä oli dominoiva IGH-klooni, joka käsitti noin 88% kaikista uudelleenjärjestelyistä. Tämä havainto ei ainoastaan vahvista B-solulymfooman diagnoosia, vaan viittaa myös siihen, että B-solulymfooma on de novo-kasvain eikä TZL: n eteneminen muuttuneella immunofenotyypillä. Toisin kuin solun pintamarkkeriekspressio, johon mikroympäristön ärsykkeet ja solun kehitysvaihe ja elinkelpoisuus voivat vaikuttaa, lymfosyyttien antigeenireseptorigeenin uudelleenjärjestelyt ovat vakaita koko lymfosyytin eliniän ajan . Näin ollen jos B-solulymfooma olisi ollut aiemmin diagnosoidun TZL: n muuntunut eteneminen, toisessa näytteessä havaitun dominoivan IGH-kloonin olisi täytynyt olla alkuperäisessä näytteessä. Alkunäytteessä oli kuitenkin monipuolinen polyklonaalinen B-solun repertuaari, eikä alkunäytteessä havaittu kloonisen IGH: n uudelleenjärjestäytymisen järjestystä.
sekvensointipohjaisen klonaalisuuden testauksen käyttö tarjosi selkeän edun elektroforeesipohjaisiin menetelmiin verrattuna. Perinteisesti klonaalisuuden testauksessa käytetään geelielektroforeesia visualisoimaan lymfosyyttien antigeenireseptorin geenijärjestelyjen monimuotoisuutta tietyssä näytteessä. Koska tämä menetelmä erottaa antigeenireseptorigeenit vain koon perusteella, se voi johtaa epäselviin tuloksiin, kun neoplastisen kloonin signaali vaimenee ei-neoplastisten lymfosyyttien melulla. Sekvensointiin perustuvalla kloonisuustestillä saadaan suurempi ”klooninen resoluutio”, koska se voi erottaa lymfosyyttikloonit sekvenssin perusteella koon päälle . Tässä tutkimuksessa sekvensointiin perustuvalla testillä tunnistettiin helposti TRB-ja TRG-kloonit molemmista näytteistä polyklonaalisesta taustasta huolimatta. Lisäksi neoplastisen kloonin TRB-ja TRG-geenisekvenssien tunnistaminen osoitti yksiselitteisesti, että hallitseva T-soluklooni oli identtinen molemmissa näytteissä. Kloonien tunnistaminen geenisekvenssin perusteella antaa suuremman luottamuksen siihen, että molemmat kloonit ovat identtisiä kuin jos kloonit tunnistetaan vain koon perusteella. Toinen NGS-pohjaisen klonaalisuuden testauksen etu on se, että kun neoplastisen kloonin sekvenssi on määritetty, se voidaan jäljittää näytteistä, vaikka se käsittäisi minuutin murto-osan kaikista uudelleenjärjestelyistä . Tässä tapauksessa lbcl: n IGH-geenisekvenssin tunnistaminen toisessa näytteessä mahdollisti tämän ”indeksisekvenssin” etsimisen alkuperäisestä näytteestä. Se, että IGH-indeksisarjaa ei löytynyt alkuperäisestä näytteestä, viittaa vahvasti siihen, että tätä b-solukloonia ei ollut silloin, kun TZL alun perin diagnosoitiin. Huomioitavaa on, että indeksikloonin havaitsemisen herkkyys riippuu suuresti sekvensointisyvyydestä.
vaikka NGS: stä oli tässä tapauksessa hyötyä kahden erillisen kloonien esiintymisen tunnistamisessa, tarvittiin myös muita diagnostisia lähestymistapoja. Ensin poistettiin kokonainen imusolmuke ja arvioitiin histopatologisesti ja immunohistokemiallisesti TZL: n sytologisen diagnoosin varmistamiseksi. Sektioissa oli homogeeninen populaatio pieniä lymfosyyttejä, joilla oli harvinaisia jäännösrakkuloita. Sytologinen arviointi kontralateraalisen popliteaalisen imusolmukkeen imusta, joka otettiin 1 vuoden kuluttua alkuperäisestä näytteestä, osoitti solujen morfologisesti vastaavan lbcl: ää eikä TZL: ää, mikä johti immunofenotyyppiseen arviointiin. Virtaussytometria vahvisti lbcl: n, joka lähes kaikissa tapauksissa koirilla on DLBCL . Vaikka sairastuneen imusolmukkeen histopatologista arviointia ei tehty, virtaussytometriset löydökset CD21 -, CD45-ja MHC II-positiivisuudesta yhdistettynä suureen solukokoon olivat hyvin yhdenmukaisia DLBCL-diagnoosin kanssa . Keskuudessa lymfoomat koirilla, TZL on ainutlaatuinen kokonaisuus, koska jopa ilman hoitoa kasvain ei voi edetä lainkaan tai vain hitaasti; on vahva rotu mieltymys; pan-leukosyytti antigeeni CD45 on tyypillisesti havaittavissa kasvainsoluissa; ja B-solun antigeeni CD21 voi olla läsnä alhaisella tasolla . Lisäksi, soluja tämän immunofenotyyppi on tunnistettu vanhemmissa Kultainennoutaja koirat ilman näyttöä imukudoksen neoplasia, ja jotkut näistä koirista myös raportoitu olevan klooni t-solupopulaatioita . On huomattava, että kloonipiikkien erottelukyky elektroforeeseihin perustuvilla menetelmillä on alhaisempi kuin sekvensointiin perustuvilla menetelmillä, ja on mahdollista, että elektroforeesilla tunnistetut kloonipopulaatiot voivat olla monimuotoisempia, jos niitä arvioidaan sekvensoinnilla. Siksi monet TZL: n biologian näkökohdat ovat edelleen epätäydellisesti luonnehdittuja.
on mahdollista, että tämän raportin koiralla oli suurentunut riski sairastua sekundaarisiin kasvaimiin aivokasvaimen säteilyn seurauksena. Sädehoito aiheuttaa lukuisia haittavaikutuksia, mukaan lukien paikallisen hoidon systeemiset vaikutukset . Tällaiset vaikutukset voivat heikentää immuunijärjestelmää, mikä puolestaan saattaa heikentää immuunijärjestelmän seurantaa ja lisätä myöhemmän syövän kehittymisen riskiä. Vaikka ihmisillä kasvaimen säteilytys liittyy useimmiten toissijainen myelooinen kasvaimet, samanlaisia yhdistyksiä koirilla ovat määrittelemättömiä . Yleensä, tietoa geneettisiä vaurioita taustalla lymphomagenesis koirilla on niukasti, ja rajoitettu joukko mutaatioita liittyi enemmän rodun kuin lymfooma tyyppi .
yhdistelmälymfooman hoito ja ennuste ihmisillä vaihtelee histologisen alatyypin mukaan . Koiran TZL: llä on veltto taudinkulku, mutta DLBCL on aggressiivinen lymfooma, jonka etenemisvapaan elinajan mediaani on 251-252 vuorokautta yhdistelmähoidolla hoidettuna . Tässä raportissa koiran induktiohoitona käytettiin standardiannosta l-asparaginaasia ja vinkristiiniä, mutta pysyvää kliinistä vastetta ei odotettu johtuen aiemmasta pitkäaikaisesta glukokortikoidialtistuksesta . Valitettavasti alustavasta suotuisasta vasteesta huolimatta hoitoa ei jatkettu, eikä lopputulosta voitu täysin arvioida.
potilaalla oli todettu kallonsisäinen massa, joka sopi parhaiten glioomaan useita kuukausia ennen lymfooman ensimmäistä diagnoosia. Ilman histopatologista arviointia ei voida täysin sulkea pois aivomassojen ei-neoplastisia syitä, kuten verisuonitapahtumia tai granulomatoottista tulehdusta. Intraaksiaalisen sijainnin kliiniset piirteet ja MRI-ominaisuudet, T2/FLAIR-hyperintensiteetti, T1-hypointensiteetti, kontrastin lisäämisen puute ja mass effect, viittasivat kuitenkin eniten kasvaimeen, kuten matala-asteiseen glioomaan . Lopullinen sädehoito johti vähintään 16 kuukauden objektiivinen tuumorivaste tällä potilaalla, joka on samanlainen tai hieman pidempi kuin raportoitu muiden intra-axial kasvaimia .
rajoituksia tälle tutkimukselle olivat se, ettei imusolmukkeesta voitu ottaa koepalaa samanaikaisesti TZL / LBCL: n kanssa, eikä post mortem-arviointia tehty. Toisen lymfooman histopatologia ja immunohistokemia olisivat mahdollistaneet lbcl: n lopullisen diagnoosin ja havainnollistaneet morfologisia löydöksiä, jotka liittyvät samanaikaisiin TZL: ään ja LBCL: ään. Samoin post mortem-arviointi olisi mahdollistanut lopullisen tunnistuksen aivoleesiosta ja lymfooman laajuudesta. Tässä tapauksessa yhdistetyn lymfooman näyttöä pidettiin kuitenkin erittäin vahvana useiden kehittyneiden ja täydentävien diagnostisten lähestymistapojen perusteella.
yhteenvetona, tämä raportti komposiitti lymfooma koira korostaa arvo useita diagnostisia lähestymistapoja erottaa kaksi de novo lymfoomat sijaan transformaatio yhden kloonin.