Ce rapport décrit l’émergence de la LBCL chez un chien avec une TZL préexistante et persistante. En oncologie humaine, la présence de deux lymphomes distincts, non liés au clonage, au sein du même organe est appelée « lymphome composite”. Cette entité comprend < 5% de tous les lymphomes chez l’homme, mais n’a jamais été rapportée auparavant chez le chien. Le diagnostic de lymphome composite nécessite une évaluation morphologique, immunohistochimique et moléculaire. Dans le cas rapporté ici, ce diagnostic était basé sur les caractéristiques cytomorphologiques et immunophénotypiques différentes des tumeurs ainsi que sur les deux signatures clonales distinctes déterminées par des tests de clonalité basés sur le NGS. La transformation de néoplasmes hématologiques indolents en formes plus agressives, telles que la leucémie lymphocytaire chronique en lymphome de haut grade, a déjà été rapportée et semble survenir occasionnellement chez le chien. Cependant, dans ce cas, les preuves combinées de modalités de test multiples suggèrent fortement la concordance de deux lymphomes distincts plutôt que l’évolution d’un lymphome indolent en une variante plus agressive.
Différencier la rechute du développement d’une tumeur de novo est difficile pour la plupart des types de cancer. Les cancers lymphoïdes diffèrent à cet égard parce que chaque clone de lymphocytes porte une séquence d’ADN unique qui peut être utilisée comme empreinte génétique pour suivre les clones de lymphocytes au fil du temps et à travers les sites anatomiques. Cette séquence génique unique est générée tôt dans le développement des lymphocytes par réarrangement des gènes des récepteurs antigéniques et confère à chaque clone lymphocytaire une spécificité antigénique unique. Les tests de clonalité évaluent la diversité des gènes des récepteurs d’antigènes lymphocytaires dans une population de lymphocytes donnée. Dans l’échantillon initial, les tests de clonalité ont confirmé le diagnostic de TZL basé sur la présence de réarrangements clonaux TRB et TRG. Un seul réarrangement TRB productif et deux réarrangements TRG improductifs étaient compatibles avec une lignée de cellules T alpha/ bêta du clone néoplasique, et l’utilisation de TRGV2 / TRJ3–2 par les deux clones dominants suggérait un réarrangement bi-allélique plutôt que le réarrangement de deux cassettes différentes sur le même chromosome. Les mêmes réarrangements ont été trouvés dans le deuxième échantillon à abondance similaire, ce qui suggère la persistance du clone de lymphocytes T néoplasiques face au traitement. En plus des réarrangements clonaux TRB et TRG, le deuxième échantillon a montré un clone IGH dominant qui représentait environ 88% de tous les réarrangements. Cette découverte confirme non seulement le diagnostic d’un lymphome à cellules B, mais suggère également que le lymphome à cellules B est une tumeur de novo plutôt qu’une progression du TZL avec un immunophénotype modifié. Contrairement à l’expression du marqueur de surface cellulaire, qui peut être influencée par des stimuli micro-environnementaux et le stade de développement et la viabilité d’une cellule, les réarrangements des gènes des récepteurs antigéniques des lymphocytes sont stables tout au long de la vie d’un lymphocyte. Par conséquent, si le lymphome à cellules B avait été une progression transformée de la TZL diagnostiquée précédemment, le clone dominant d’ISFH détecté dans le deuxième échantillon aurait dû être présent dans l’échantillon initial. Cependant, l’échantillon initial avait un répertoire de cellules B polyclonales diversifié, et la séquence du réarrangement clonal de l’IGH n’a pas été détectée dans l’échantillon initial.
L’utilisation de tests de clonalité basés sur le séquençage a fourni un avantage distinct par rapport aux méthodes basées sur l’électrophorèse. Traditionnellement, le test de clonalité utilise l’électrophorèse sur gel pour visualiser la diversité des arrangements géniques des récepteurs antigéniques des lymphocytes dans un échantillon donné. Comme cette méthode ne distingue que les gènes des récepteurs antigéniques par leur taille, elle peut donner des résultats équivoques lorsque le signal d’un clone néoplasique est éteint par le bruit des lymphocytes non néoplasiques. Le test de clonalité basé sur le séquençage donne une « résolution clonale » plus élevée car il permet de distinguer les clones de lymphocytes en fonction de la séquence au-dessus de la taille. Dans cette étude, des tests basés sur le séquençage ont facilement identifié des clones de TRB et de TRG dans les deux échantillons malgré la présence d’un fond polyclonal. De plus, l’identification des séquences de gènes TRB et TRG du clone néoplasique a déterminé sans équivoque que le clone de lymphocytes T dominants était identique dans les deux échantillons. L’identification des clones par séquence de gènes confère une plus grande confiance dans l’identité des deux clones que si les clones sont identifiés uniquement par leur taille. Un autre avantage des tests de clonalité basés sur NGS est qu’une fois la séquence d’un clone néoplasique déterminée, elle peut être tracée dans des échantillons même si elle comprend une fraction infime de tous les réarrangements. Dans le cas présent, l’identification de la séquence génique IGH du LBCL dans le deuxième échantillon a permis de rechercher cette » séquence d’index » dans l’échantillon initial. Le fait que la séquence d’indice IGH n’ait pas pu être trouvée dans l’échantillon initial suggère fortement que ce clone de lymphocytes B n’était pas présent au moment où le TZL a été initialement diagnostiqué. Il est à noter que la sensibilité de détection d’un clone d’index dépend fortement de la profondeur de séquençage.
Bien que le NGS ait été utile pour identifier la présence de deux clones distincts dans ce cas, d’autres approches diagnostiques étaient également nécessaires. Un ganglion lymphatique affecté entier a d’abord été retiré et évalué histopathologiquement et immunohistochimiquement pour confirmer le diagnostic cytologique de TZL. Les sections consistaient en une population homogène de petits lymphocytes avec de rares follicules restants. L’évaluation cytologique d’une aspiration du ganglion lymphatique poplité controlatéral prélevée 1 an après l’échantillon initial a permis d’identifier des cellules morphologiquement compatibles avec la LBCL plutôt que la TZL, ce qui a incité une évaluation immunophénotypique. La cytométrie en flux a confirmé le LBCL, qui dans pratiquement tous les cas chez le chien est un DLBCL. Bien qu’aucune évaluation histopathologique du ganglion lymphatique affecté n’ait été effectuée, les résultats cytométriques en flux de la positivité du CD21, du CD45 et du CMH II combinés à une grande taille de cellules étaient très cohérents avec le diagnostic de DLBCL. Parmi les lymphomes chez le chien, le TZL est une entité unique car même sans traitement, le néoplasme peut ne pas progresser du tout ou seulement lentement; il existe une forte prédilection de la race; l’antigène pan-leucocytaire CD45 est généralement indétectable sur les cellules tumorales; et l’antigène des lymphocytes B CD21 peut être présent à faible niveau. De plus, des cellules avec cet immunophénotype ont été identifiées chez des chiens Golden Retriever plus âgés sans preuve de néoplasie lymphoïde, et certains de ces chiens ont également des populations de cellules T clonales. Il est à noter que la résolution des pics clonaux avec les méthodes basées sur l’électrophorèse est plus faible qu’avec les méthodes basées sur le séquençage, et il est concevable que les populations clonales identifiées par électrophorèse puissent être plus diverses si elles sont évaluées par séquençage. Par conséquent, de nombreux aspects de la biologie du TZL restent incomplètement caractérisés.
Il est possible que le chien dans ce rapport ait eu un risque accru de développer des néoplasmes secondaires à la suite d’un rayonnement de la tumeur cérébrale. La radiothérapie induit une multitude d’effets indésirables, y compris les effets systémiques de la thérapie locale. De tels effets peuvent compromettre le système immunitaire, ce qui pourrait à son tour réduire la surveillance immunitaire et augmenter le risque de développement ultérieur d’un cancer. Alors que chez l’homme, l’irradiation tumorale est le plus souvent associée à des néoplasmes myéloïdes secondaires, des associations similaires chez le chien sont indéterminées. En général, les connaissances sur les lésions génétiques sous-jacentes à la lymphomagénèse chez le chien sont rares, et un ensemble limité de mutations était plus fortement associé à la race qu’au type de lymphome.
Le traitement et le pronostic du lymphome composite chez l’homme varient en fonction du sous-type histologique. Le TZL canin a une évolution indolente de la maladie, mais le DLBCL est un lymphome agressif avec une survie médiane sans progression de 251 à 252 jours, lorsqu’il est traité par une chimiothérapie combinée. Le traitement d’induction pour le chien dans ce rapport était une dose standard de L-asparaginase et de vincristine, mais une réponse clinique durable n’était pas attendue en raison de l’exposition antérieure à long terme aux glucocorticoïdes. Malheureusement, malgré une réponse favorable initiale, le traitement n’a pas été poursuivi et les résultats n’ont pas pu être entièrement évalués.
Le patient avait reçu un diagnostic de masse intracrânienne plus conforme au gliome plusieurs mois avant le premier diagnostic de lymphome. Sans évaluation histopathologique, les causes non néoplasiques des masses cérébrales telles que les événements vasculaires ou l’inflammation granulomateuse ne peuvent être entièrement exclues. Cependant, les caractéristiques cliniques et les caractéristiques IRM de la localisation intra-axiale, de l’hyperintensité T2 / FLAIR, de l’hypointensité T1, de l’absence d’amélioration du contraste et de l’effet de masse étaient les plus suggestives d’un néoplasme tel qu’un gliome de bas grade. La radiothérapie définitive a entraîné au moins 16 mois de réponse tumorale objective chez ce patient, ce qui est similaire ou légèrement plus long que celui rapporté pour d’autres tumeurs intra-axiales.
Les limites de cette enquête étaient l’indisponibilité d’une biopsie du ganglion lymphatique avec TZL/LBCL simultanés, et l’absence d’évaluation post mortem. L’histopathologie et l’immunohistochimie du deuxième lymphome auraient permis un diagnostic plus définitif de la LBCL et illustré les résultats morphologiques associés à la TZL et à la LBCL simultanées. De même, l’évaluation post mortem aurait permis d’identifier de manière concluante la lésion cérébrale et l’étendue du lymphome. Néanmoins, les preuves d’un lymphome composite dans ce cas ont été considérées comme très solides sur la base de multiples approches diagnostiques sophistiquées et complémentaires.
En conclusion, ce rapport sur un lymphome composite chez un chien met en évidence la valeur de plusieurs approches diagnostiques pour différencier deux lymphomes de novo plutôt que la transformation d’un seul clone.