Quantification du décalage gauche des leucocytes
Les premiers types de neutrophiles morphologiquement reconnaissables sont le myéloblaste, le promyélocyte et le myélocyte. Ces cellules mûrissent en métamyélocytes, puis en bandes, et enfin en neutrophiles segmentés (Fig. 7.4). Les myéloblastes, les promyélocytes et les myélocytes sont capables de division cellulaire, comme en témoigne l’incorporation de thymidine tritiée dans leur ADN nucléaire et vérifiée par observation directe en culture.22,23 Ces trois stades précoces des neutrophiles sont collectivement appelés compartiment mitotique des neutrophiles, ou pool prolifératif des neutrophiles. Pendant l’infection, le compartiment mitotique des neutrophiles ajoute généralement une ou deux divisions cellulaires supplémentaires, augmentant ainsi la taille du pool prolifératif.23 L’ajout d’une division supplémentaire double le nombre de neutrophiles matures produits. Pendant l’infection, le nombre de promyélocytes et de myélocytes dans la moelle osseuse augmente généralement en raison des divisions cellulaires ajoutées.24
Le décalage gauche des neutrophiles est une expression utilisée pour indiquer une augmentation anormale des neutrophiles immatures dans la circulation.25-27 Une méthode de quantification du décalage vers la gauche, en particulier en hématologie néonatale, est le rapport neutrophiles immatures sur total (I/T).25-30 Un mécanisme permettant d’administrer plus de neutrophiles aux tissus infectés est la libération prématurée de neutrophiles postmitotiques immatures (métamyélocytes et bandes) de la moelle dans la circulation. Cela conduit à une augmentation du ratio.26,31-35
Le rapport I/T des neutrophiles nécessite un comptage manuel des cellules différentielles; un technologue en hématologie examine au microscope 100 leucocytes sur un film sanguin coloré, en énumérant chaque cellule en fonction de caractéristiques morphologiques. Le rapport I / T est généralement calculé comme le pourcentage de neutrophiles de bande plus les métamyélocytes divisé par le pourcentage de neutrophiles segmentés plus les neutrophiles de bande plus les métamyélocytes. Une deuxième méthode courante de quantification du décalage vers la gauche est le nombre absolu de bandes, qui nécessite également un différentiel manuel. Le pourcentage de leucocytes identifiés comme bandes est multiplié par le nombre de leucocytes et la valeur exprimée en bandes / µL de sang.36 La fiabilité du rapport I / T est affectée par les grandes différences entre les observateurs dans la classification des neutrophiles en bandes ou en formes segmentées.29
Le comptage différentiel automatisé des leucocytes est une innovation relativement nouvelle en hématologie de laboratoire clinique; un grand nombre de leucocytes sont classés par des techniques de cytométrie en flux en fonction de leur taille et de leurs caractéristiques cytoplasmiques et nucléaires.4,28,37 Une petite fraction des promyélocytes, des myélocytes et des métamyélocytes s’échappent de la moelle et se trouvent dans le sang, et ceux-ci peuvent être mesurés par certains analyseurs d’hématologie. Dans un comptage de cellules différentielles automatisé sur certains modèles d’analyseurs d’hématologie Sysmex, le décalage vers la gauche est quantifié par des granulocytes immatures (IG). Ces résultats peuvent être rapportés comme le pourcentage de granulocytes immatures (IG%) ou le nombre absolu de granulocytes immatures (IG /µL). Le % d’IG et l’IG/µL sont quelque peu analogues, mais techniquement distincts, du rapport neutrophile I/T et du nombre absolu de bandes. Les différentiels automatisés ont l’avantage de ne pas nécessiter un frottis sanguin ni le temps du technicien pour effectuer une analyse microscopique.4,5 De plus, des performances améliorées de la différence automatisée par rapport aux méthodes manuelles ont été rapportées chez des populations adultes sur la base d’un échantillon beaucoup plus important de leucocytes dénombrés. En outre, l’erreur humaine est supprimée dans la discrimination entre les types de cellules, car l’affectation du type de cellule est déterminée automatiquement par des techniques de déclenchement prédéfinies.38 Fig. 7.5 montre le canal différentiel des globules blancs (WDF) produit par les analyseurs Sysmex.6
Dans de nombreux laboratoires cliniques, les dénombrements différentiels automatisés ont remplacé les dénombrements manuels pour les patients adultes.5,39 Un obstacle à l’adoption de différentiels leucocytaires automatisés en néonatologie était l’absence d’intervalles de référence pour le % d’IG et l’IG / µL dans les populations néonatales.40 De plus, l’utilité des IG% et IG/µL en tant que biomarqueurs de l’infection n’avait pas été comparée directement au rapport neutrophiles I/T et au nombre absolu de bandes chez les nouveau-nés infectés par rapport aux nouveau-nés non infectés.
Des intervalles de référence (limites inférieure et supérieure du 5e et du 95e centile) pour les IG % et IG/µL ont été établis à l’aide des CBC de nouveau-nés sans signe d’infection. Figue. 7.6 fournit des diagrammes d’intervalles de référence pour IG% et IG /µL pour la première semaine après la naissance.41
Les quatre méthodes de quantification du décalage vers la gauche présentaient des performances statistiques similaires pour suggérer le diagnostic d’infection (tableau 7.1). Pour chacun des quatre, la sensibilité était faible (12% -15%) tandis que la spécificité était forte (90% -95%), et la valeur prédictive positive (VPP) et la valeur prédictive négative (VAN) se situaient généralement entre le bas et le milieu des années 60%. Les combinaisons des quatre avaient tendance à diminuer la sensibilité, mais augmentaient le VPP.41
Le rapport neutrophile I /T n’est pas une méthode sensible d’identification de l’infection, mais une valeur élevée est assez spécifique à l’infection. Le nombre d’IG /µL et de bandes est similaire au rapport I /T et au % d’IG. Ces résultats nous ont amenés à conclure qu’à la plupart des fins, un différentiel automatisé devrait servir aussi bien qu’un différentiel manuel, semblable aux conclusions tirées des CBC obtenues auprès d’adultes.39,42 De plus, nous avons trouvé trois comptages différentiels manuels qui présentaient ce que nous supposions être des erreurs de transposition (bandes placées dans la colonne seg, et vice versa). Ces cas présentaient des rapports I / T extraordinairement élevés (> 0,8), mais les patients apparaissaient bien et lorsque les CBC étaient immédiatement répétés, les rapports I / T étaient normaux (< 0,2). De telles erreurs ne se produiraient pas avec des comptages différentiels automatisés.
Le CBC avec un différentiel leucocytaire est l’un des tests de laboratoire les plus courants commandés sur les nouveau-nés et les jeunes nourrissons. Nous concluons que pour quantifier le décalage vers la gauche des leucocytes, les IG% et IG / µL d’un comptage différentiel automatisé sur l’analyseur d’hématologie Sysmex sont comparables au rapport I / T et au comptage de bandes absolues basé sur un comptage différentiel manuel, bien que les valeurs IG et I / T soient mal corrélées. Les leucocytes différentiels automatisés utilisant d’autres types de compteurs cellulaires doivent également être comparés aux dénombrements différentiels manuels. Nous concluons qu’un comptage différentiel automatisé devrait suffire pour la médecine néonatale. Pour les nouveau-nés sélectionnés chez lesquels l’identification de l’infection est l’objectif du CBC, l’ajout d’un comptage différentiel manuel pourrait légèrement améliorer les performances du test.