denne rapporten beskriver fremveksten AV LBCL hos en hund med pre-eksisterende OG vedvarende TZL. I human onkologi, tilstedeværelse av to distinkte, klonalt urelaterte, lymfomer i samme organ kalles «sammensatt lymfom». Denne enheten omfatter < 5% av alle lymfomer hos mennesker, men har ikke tidligere blitt rapportert hos hunder. Diagnosen sammensatt lymfom krever morfologisk, immunhistokjemisk og molekylær vurdering . I tilfellet rapportert her, var denne diagnosen basert på de forskjellige cytomorfologiske og immunfenotypiske egenskapene til svulstene, samt de to distinkte klonale signaturene bestemt AV NGS-basert klonalitetstesting. Transformasjon av indolente hematologiske neoplasmer til mer aggressive former, som kronisk lymfocytisk leukemi til høyverdig lymfom, har tidligere blitt rapportert, og ser ut til å forekomme av og til hos hunder . Derimot, i dette tilfellet, den kombinerte bevis for flere testing modaliteter tyder sterkt på sammenfall av to distinkte lymfomer snarere enn utviklingen av en lat lymfom til en mer aggressiv variant.
Å Skille tilbakefall fra utvikling av en de novo tumor er utfordrende for de fleste krefttyper. Lymfoide kreftformer er forskjellige i denne forbindelse fordi hver lymfocyttklon bærer en unik DNA-sekvens som kan brukes som et genetisk fingeravtrykk for å spore lymfocyttkloner over tid og på tvers av anatomiske steder. Denne unike gensekvensen genereres tidlig i lymfocyttutvikling ved omlegging av antigenreseptorgener, og gir hver lymfocyttklon med unik antigenspesifisitet. Klonalitetstesting vurderer mangfoldet av lymfocyttantigenreseptorgener i en gitt lymfocyttpopulasjon. I den første prøven bekreftet klonalitetstesting diagnosen TZL basert på tilstedeværelsen av klonal trb og TRG omarrangementer. En enkelt produktiv trb-omorganisering og to uproduktive trg-omarrangementer var i samsvar med en alfa / beta-t-cellelinje av den neoplastiske klonen, og bruk AV TRGV2 / TRJ3 – 2 av begge dominerende kloner tyder på en bi-allelisk omplassering i stedet for omplassering av to forskjellige kassetter på samme kromosom. De samme omarrangementene ble funnet i den andre prøven ved lignende overflod, noe som antyder utholdenhet av den neoplastiske t-celleklonen i møte med behandlingen. I tillegg til klonale trb-og TRG-omarrangementer viste den andre prøven en dominerende IGH-klon som utgjorde omtrent 88% av alle omarrangementer. Dette funnet bekrefter ikke bare diagnosen av et b-cellelymfom, men antyder også At b-cellelymfom er en de novo-tumor i stedet for en progresjon AV TZL med endret immunfenotype. I motsetning til celleoverflatemarkøruttrykk, som kan påvirkes av mikromiljøstimuli og cellens utviklingsstadium og levedyktighet, er lymfocytt antigen-reseptor-genrearrangementer stabile gjennom hele livet til en lymfocytt . Følgelig, Hvis B-celle lymfom hadde vært en transformert progresjon av tidligere diagnostisert TZL, da den dominerende IGH klone oppdaget i den andre prøven ville ha måttet være til stede i den første prøven. Imidlertid hadde den første prøven et mangfoldig polyklonal b-cellerepertoar, og sekvensen av klonal igh-omleggingen ble ikke påvist i den første prøven.
bruken av sekvenseringsbasert klonalitetstesting ga en klar fordel over elektroforesebaserte metoder. Tradisjonelt bruker klonalitetstesting gelelektroforese for å visualisere mangfoldet av lymfocyttantigenreseptor – genarrangementer i en gitt prøve. Siden denne metoden bare skiller antigenreseptorgener etter størrelse, kan det resultere i tvetydige resultater når signalet til en neoplastisk klon slokkes av støy av ikke-neoplastiske lymfocytter. Sekvensering basert klonalitet testing gir en høyere ‘klonal oppløsning’ fordi det kan skille lymfocytt kloner basert på sekvens på toppen av størrelse . I denne studien identifiserte sekvenseringsbasert testing lett TRB-og TRG-kloner i begge prøvene til tross for tilstedeværelsen av en polyklonal bakgrunn. Videre, identifikasjon AV TRB og TRG gensekvenser av neoplastisk klone utvetydig bestemt at den dominerende t-celle klon var identisk i begge prøvene. Identifisering av kloner ved gensekvens gir høyere tillit til at begge kloner er identiske enn om kloner bare identifiseres etter størrelse. En annen fordel MED ngs-basert klonalitetstesting er at når sekvensen av en neoplastisk klon er bestemt, kan den spores i prøver, selv om den består av en liten brøkdel av alle omarrangementer . I det nåværende tilfellet tillot identifikasjon AV IGH-gensekvensen TIL LBCL i den andre prøven å søke etter denne ‘indekssekvensen’ i den første prøven. Det faktum AT IGH-indekssekvensen ikke ble funnet i den første prøven tyder sterkt på at Denne b-celleklonen ikke var tilstede på det tidspunktet DA TZL først ble diagnostisert. Av notatet er følsomheten for å oppdage en indeksklon svært avhengig av sekvenseringsdybden.Selv OM NGS var nyttig for å identifisere tilstedeværelsen av to forskjellige kloner i dette tilfellet, var andre diagnostiske tilnærminger også nødvendige. En hel berørt lymfeknute ble først fjernet og vurdert histopatologisk og immunhistokjemisk for å bekrefte den cytologiske diagnosen TZL. Seksjoner besto av en homogen populasjon av små lymfocytter med sjeldne restfollikler. Cytologisk evaluering av et aspirat av den kontralaterale popliteal lymfeknute samlet 1 år etter at den første prøven identifiserte celler morfologisk konsistente MED LBCL i stedet FOR TZL, noe som førte til immunfenotypisk vurdering. Flowcytometri bekreftet LBCL, som i nesten alle tilfeller hos hunder ER EN DLBCL . Selv om histopatologisk vurdering av den berørte lymfeknuten ikke ble utført, var flowcytometriske funn AV CD21, CD45 OG MHC II positivitet kombinert med stor cellestørrelse svært konsistente med DIAGNOSEN DLBCL . Blant lymfomer hos hunder ER TZL en unik enhet siden selv uten terapi kan neoplasmen ikke utvikle seg i det hele tatt eller bare sakte; det er en sterk rase predileksjon; pan-leukocytt antigen CD45 er vanligvis uoppdagelig på tumorceller; Og B-celle antigen CD21 kan være tilstede på lavt nivå . Videre har celler med denne immunfenotypen blitt identifisert hos eldre Golden Retrieverhunder uten tegn på lymfoid neoplasi, og noen av disse hundene ble også rapportert å ha klonale t-cellepopulasjoner . Oppløsningen av klonaltopper med elektroforesebaserte metoder er lavere enn med sekvenseringsbaserte metoder, og det er tenkelig at klonale populasjoner identifisert ved elektroforese kan være mer varierte hvis de vurderes ved sekvensering. Derfor forblir mange aspekter AV TZLS biologi ufullstendig karakterisert.
det er mulig at hunden i denne rapporten hadde økt risiko for å utvikle sekundære neoplasmer etter stråling av hjernesvulsten. Strålebehandling induserer en rekke bivirkninger, inkludert systemiske effekter fra lokal terapi . Slike effekter kan kompromittere immunforsvaret, noe som igjen kan redusere immunovervåking og øke risikoen for senere kreftutvikling. Mens hos mennesker er svulstbestråling oftest forbundet med sekundære myeloide neoplasmer, er lignende foreninger hos hunder ubestemt . Generelt er kunnskap om genetiske lesjoner som ligger til grunn for lymfomagenese hos hunder sparsom, og et begrenset sett med mutasjoner var mer assosiert med rase enn med lymfomtype .
Behandling og prognose av sammensatt lymfom hos mennesker varierer avhengig av histologisk subtype . Canine TZL har et lat sykdomsforløp, MEN DLBCL er et aggressivt lymfom med median progresjonsfri overlevelse på 251-252 dager, når det behandles med kombinert kjemoterapi . Induksjonsbehandling for hunden i denne rapporten var en standarddose Av L-asparaginase og vinkristin, men en varig klinisk respons var ikke forventet på grunn av tidligere langvarig eksponering for glukokortikoider . Dessverre, til tross for en innledende gunstig respons, ble behandlingen ikke videreført, og utfallet kunne ikke vurderes fullt ut.
pasienten hadde fått en intrakraniell masse som var mest konsistent med gliom flere måneder før den første diagnosen lymfom. Uten histopatologisk vurdering kan ikke-neoplastiske årsaker til hjernemasser som vaskulære hendelser eller granulomatøs betennelse helt utelukkes. De kliniske trekkene OG MR-karakteristikkene ved intra-aksial lokalisering, t2 / FLAIR hyperintensitet, T1 hypointensitet, mangel på kontrastforbedring og masseeffekt tyder imidlertid mest på en neoplasma som et lavgradig gliom . Endelig strålebehandling resulterte i minst 16 måneders objektiv tumorrespons hos denne pasienten, som er lik eller litt lengre enn rapportert for andre intra-aksiale svulster .
Begrensninger i denne undersøkelsen var utilgjengelighet av biopsi fra lymfeknute med samtidig TZL / LBCL, og mangel på post mortem vurdering. Histopatologi og immunhistokjemi av andre lymfom ville ha tillatt mer definitiv diagnose AV LBCL, og illustrert morfologiske funn assosiert med samtidig TZL og LBCL. Tilsvarende, post mortem evaluering ville ha tillatt avgjørende identifisering av hjerneskade og omfanget av lymfom. Likevel ble bevis for et sammensatt lymfom i dette tilfellet ansett som svært sterkt basert på flere sofistikerte og komplementære diagnostiske tilnærminger.som konklusjon fremhever denne rapporten av et sammensatt lymfom hos en hund verdien av flere diagnostiske tilnærminger for å skille mellom to de novo lymfomer i stedet for transformasjon av en enkelt klon.