Acest raport descrie apariția LBCL la un câine cu tzl preexistent și persistent. În oncologia umană, prezența a două limfoame distincte, fără legătură clonică, în cadrul aceluiași organ este denumită „limfom compozit”. Această entitate cuprinde< 5% din totalul limfoamelor la om , dar nu a fost raportată anterior la câini. Diagnosticul limfomului compozit necesită evaluare morfologică, imunohistochimică și moleculară . În cazul raportat aici, acest diagnostic s-a bazat pe caracteristicile citomorfologice și imunofenotipice diferite ale tumorilor, precum și pe cele două semnături clonale distincte determinate prin testarea clonalității bazate pe NGS. Transformarea neoplasmelor hematologice indolente în forme mai agresive, cum ar fi leucemia limfocitară cronică în limfom de grad înalt, a fost raportată anterior și pare să apară ocazional la câini . Cu toate acestea, în acest caz, dovezile combinate ale modalităților multiple de testare sugerează puternic concurența a două limfoame distincte, mai degrabă decât evoluția unui limfom indolent într-o variantă mai agresivă.
diferențierea recidivei de dezvoltarea unei tumori de novo este o provocare pentru majoritatea tipurilor de cancer. Cancerele limfoide diferă în această privință, deoarece fiecare clonă de limfocite poartă o secvență ADN unică care poate fi utilizată ca amprentă genetică pentru a urmări clonele limfocitelor în timp și în siturile anatomice. Această secvență genică unică este generată la începutul dezvoltării limfocitelor prin rearanjarea genelor receptorului antigenului și conferă fiecărei clone de limfocite specificitatea antigenului unic. Testarea clonalității evaluează diversitatea genelor receptorului antigenului limfocitelor într-o anumită populație de limfocite. În eșantionul inițial, testarea clonalității a confirmat diagnosticul de TZL pe baza prezenței rearanjamentelor clonale TRB și TRG. O singură rearanjare productivă TRB și două rearanjări neproductive TRG au fost în concordanță cu o linie de celule T alfa/beta a clonei neoplazice, iar utilizarea TRGV2/TRJ3–2 de către ambele clone dominante a sugerat o rearanjare bi-alelică mai degrabă decât rearanjarea a două casete diferite pe același cromozom. Aceleași rearanjări au fost găsite în al doilea eșantion la abundență similară, ceea ce sugerează persistența clonei celulelor T neoplazice în fața tratamentului. În plus față de rearanjările clonale TRB și TRG, al doilea eșantion a arătat o clonă IGH dominantă care a cuprins aproximativ 88% din toate rearanjările. Această constatare nu numai că confirmă diagnosticul unui limfom cu celule B, dar sugerează, de asemenea, că limfomul cu celule B este o tumoare de novo, mai degrabă decât o progresie a TZL cu imunofenotip modificat. Spre deosebire de expresia markerului suprafeței celulare, care poate fi influențată de stimulii micro-mediului și de stadiul de dezvoltare și viabilitatea unei celule, rearanjările genei receptorului antigenului limfocitelor sunt stabile pe tot parcursul vieții unui limfocit . În consecință, dacă limfomul cu celule B ar fi fost o progresie transformată a TZL diagnosticat anterior, atunci clona IGH dominantă detectată în a doua probă ar fi trebuit să fie prezentă în proba inițială. Cu toate acestea, eșantionul inițial a avut un repertoriu divers de celule B policlonale, iar secvența rearanjării IGH clonale nu a fost detectată în eșantionul inițial.
utilizarea testelor de clonalitate bazate pe secvențiere a oferit un avantaj distinct față de metodele bazate pe electroforeză. În mod tradițional, testarea clonalității utilizează electroforeza în gel pentru a vizualiza diversitatea aranjamentelor genei receptorului antigenului limfocitelor într-o probă dată. Deoarece această metodă distinge doar genele receptorului antigenului după mărime, poate duce la rezultate echivoce atunci când semnalul unei clone neoplazice este stins de zgomotul limfocitelor non-neoplazice. Testarea clonalității bazată pe secvențiere produce o rezoluție clonală mai mare, deoarece poate distinge clonele limfocitelor pe baza secvenței în funcție de dimensiune . În acest studiu, testarea bazată pe secvențiere a identificat cu ușurință clonele TRB și TRG în ambele probe, în ciuda prezenței unui fundal policlonal. Mai mult, identificarea secvențelor genei TRB și TRG ale clonei neoplazice a determinat fără echivoc că clona dominantă a celulelor T a fost identică în ambele probe. Identificarea clonelor prin secvența genică conferă o încredere mai mare în faptul că ambele Clone sunt identice decât dacă clonele sunt identificate numai prin dimensiune. Un alt avantaj al testării clonalității bazate pe NGS este că, odată determinată secvența unei clone neoplazice, aceasta poate fi urmărită în probe chiar dacă cuprinde o fracțiune minusculă din toate rearanjările . În cazul actual, identificarea secvenței genei IGH a LBCL în al doilea eșantion a permis căutarea acestei secvențe index în eșantionul inițial. Faptul că secvența indicelui IGH nu a putut fi găsită în eșantionul inițial sugerează cu tărie că această clonă de celule B nu era prezentă în momentul în care TZL a fost diagnosticat inițial. De remarcat, sensibilitatea detectării unei clone index depinde în mare măsură de adâncimea de secvențiere.
deși NGS a fost util pentru identificarea prezenței a două clone distincte în acest caz, au fost necesare și alte abordări diagnostice. Un întreg ganglion limfatic afectat a fost inițial îndepărtat și evaluat histopatologic și imunohistochimic pentru a confirma diagnosticul citologic al TZL. Secțiunile au constat dintr-o populație omogenă de limfocite mici cu foliculi rari rămași. Evaluarea citologică a unui aspirat al ganglionului limfatic popliteal contralateral colectat la 1 an după ce proba inițială a identificat celule morfologic compatibile cu LBCL, mai degrabă decât cu TZL, ceea ce a determinat evaluarea imunofenotipică. Citometria de flux a confirmat LBCL, care în aproape toate cazurile la câini este un DLBCL . Deși evaluarea histopatologică a ganglionului limfatic afectat nu a fost efectuată, constatările citometrice în flux ale pozitivității CD21, CD45 și MHC II combinate cu dimensiunea mare a celulelor au fost foarte compatibile cu diagnosticul de DLBCL . Printre limfoamele la câini, TZL este o entitate unică, deoarece chiar și fără terapie neoplasmul poate să nu progreseze deloc sau doar încet; există o puternică predilecție a rasei; antigenul Pan-leucocitar CD45 este de obicei nedetectabil pe celulele tumorale; iar antigenul celulelor B CD21 poate fi prezent la nivel scăzut . În plus, celulele cu acest imunofenotip au fost identificate la câinii Golden Retriever mai în vârstă, fără dovezi de neoplazie limfoidă, iar unii dintre acești câini au fost, de asemenea, raportați că au populații de celule T clonale . De remarcat, rezoluția vârfurilor clonale cu metode bazate pe electroforeză este mai mică decât în cazul metodelor bazate pe secvențiere și este posibil ca populațiile clonale identificate prin electroforeză să fie mai diverse dacă sunt evaluate prin secvențiere. Prin urmare, multe aspecte ale biologiei TZL rămân incomplet caracterizate.
este posibil ca câinele din acest raport să aibă un risc crescut de a dezvolta neoplasme secundare în urma radiației tumorii cerebrale. Radioterapia induce o multitudine de efecte adverse, inclusiv efecte sistemice din terapia locală . Astfel de efecte pot compromite sistemul imunitar, ceea ce la rândul său ar putea reduce supravegherea imună și crește riscul dezvoltării ulterioare a cancerului. În timp ce la om iradierea tumorii este cel mai adesea asociată cu neoplasme mieloide secundare, asociații similare la câini sunt nedeterminate . În general, cunoașterea leziunilor genetice care stau la baza limfomagenezei la câini este redusă, iar un set limitat de mutații a fost asociat mai mult cu rasa decât cu tipul de limfom .
tratamentul și prognosticul limfomului compozit la om variază în funcție de subtipul histologic . Canine TZL are un curs de boală indolentă, dar DLBCL este un limfom agresiv cu supraviețuire mediană fără progresie de 251-252 zile, când este tratat cu chimioterapie combinată . Terapia de inducție pentru câine în acest raport a fost o doză standard de l-asparaginază și vincristină, dar nu a fost de așteptat un răspuns clinic durabil din cauza expunerii anterioare pe termen lung la glucocorticoizi . Din păcate, în ciuda unui răspuns inițial favorabil, terapia nu a fost continuată, iar rezultatul nu a putut fi evaluat pe deplin.
pacientul fusese diagnosticat cu o masă intracraniană cea mai consistentă cu gliomul cu câteva luni înainte de primul diagnostic de limfom. Fără evaluarea histopatologică, cauzele non-neoplazice ale masei cerebrale, cum ar fi evenimentele vasculare sau inflamația granulomatoasă, nu pot fi complet excluse. Cu toate acestea, caracteristicile clinice și caracteristicile RMN ale localizării intraaxiale, hiperintensitatea T2/FLAIR, hipointensitatea T1, lipsa intensificării contrastului și efectul de masă au fost cele mai sugestive pentru un neoplasm, cum ar fi un gliom de grad scăzut . Radioterapia definitivă a dus la cel puțin 16 luni de răspuns tumoral obiectiv la acest pacient, care este similar sau puțin mai lung decât cel raportat pentru alte tumori intraaxiale .
limitările acestei investigații au fost indisponibilitatea unei biopsii din ganglionul limfatic cu tzl / LBCL concomitent și lipsa evaluării post mortem. Histopatologia și imunohistochimia celui de-al doilea limfom ar fi permis un diagnostic mai definitiv al LBCL și ar fi ilustrat constatările morfologice asociate cu tzl și lbcl concurente. În mod similar, evaluarea post mortem ar fi permis identificarea concludentă a leziunii cerebrale și amploarea limfomului. Cu toate acestea, dovezile pentru un limfom compozit în acest caz au fost considerate foarte puternice pe baza mai multor abordări diagnostice sofisticate și complementare.
În concluzie, acest raport al unui limfom compozit la un câine evidențiază valoarea abordărilor multiple de diagnostic pentru a diferenția între două limfoame de novo, mai degrabă decât transformarea unei singure clone.