Nella cromatografia in fase normale, la fase stazionaria è polare e la fase mobile non polare. In fase inversa abbiamo esattamente l’opposto; la fase stazionaria è non polare e la fase mobile è polare. Le fasi stazionarie tipiche per la cromatografia in fase normale sono la silice o parti organiche con gruppi funzionali ciano e amminici. Per la fase inversa, gli idrocarburi alchilici sono la fase stazionaria preferita; l’ottadecile (C18) è la fase stazionaria più comune, ma l’ottile (C8) e il butile (C4) sono utilizzati anche in alcune applicazioni. Le designazioni per i materiali a fase inversa si riferiscono alla lunghezza della catena idrocarburica.
Nella cromatografia in fase normale, i composti meno polari eluiscono per primi e i composti più polari eluiscono per ultimi. La fase mobile è costituita da un solvente non polare come esano o eptano mescolato con un solvente leggermente più polare come isopropanolo, acetato di etile o cloroformio. La ritenzione diminuisce all’aumentare della quantità di solvente polare nella fase mobile. Nella cromatografia a fase inversa, i composti più polari eluiscono per primi con i composti più non polari che eluiscono per ultimi. La fase mobile è generalmente una miscela binaria di acqua e un solvente organico polare miscibile come metanolo, acetonitrile o THF. La ritenzione aumenta all’aumentare della quantità di solvente polare (acqua) nella fase mobile. La cromatografia di fase normale, un meccanismo adsorbente, viene utilizzata per l’analisi di soluti facilmente solubili in solventi organici, in base alle loro differenze polari come ammine, acidi, complessi metallici, ecc.. La cromatografia a fase inversa, un meccanismo di partizione, viene tipicamente utilizzata per le separazioni da differenze non polari.
La” superficie dell’idruro ” distingue il materiale di supporto da altri materiali di silice; la maggior parte dei materiali di silice utilizzati per la cromatografia hanno una superficie composta principalmente da silanoli (-Si-OH). In una “superficie idruro” i gruppi terminali sono principalmente-Si-H. La superficie idruro può anche essere funzionalizzata con acidi carbossilici e gruppi alchilici a catena lunga. Le fasi mobili per ANPC sono basate su un solvente organico (come metanolo o acetonitrile) con una piccola quantità di acqua; quindi, la fase mobile è sia “acquosa” (l’acqua è presente) che “normale” (meno polare della fase stazionaria). Pertanto, i soluti polari (come acidi e ammine) sono maggiormente trattenuti, con la ritenzione che diminuisce all’aumentare della quantità di acqua nella fase mobile.
Tipicamente la quantità della componente non polare nella fase mobile deve essere del 60% o superiore con il punto esatto di maggiore ritenzione a seconda del soluto e della componente organica della fase mobile. Una vera fase stazionaria ANP sarà in grado di funzionare sia nella fase invertita che nella fase normale con solo la quantità di acqua nell’eluente che varia. Quindi un continuum di solventi può essere utilizzato da 100% acquoso a organico puro. La conservazione dell’ANP è stata dimostrata per vari composti polari sulle fasi stazionarie basate idruro. Recenti indagini hanno dimostrato che i materiali idruro di silice hanno uno strato d’acqua molto sottile (circa 0,5 monostrato) rispetto alle fasi HILICHE che possono avere da 6-8 monostrati. Inoltre la carica negativa sostanziale sulla superficie delle fasi idruro è il risultato di adsorbimento di ioni idrossido dal solvente piuttosto che silanoli.