Bei der Normalphasenchromatographie ist die stationäre Phase polar und die mobile Phase unpolar. In umgekehrter Phase haben wir genau das Gegenteil; Die stationäre Phase ist unpolar und die mobile Phase ist polar. Typische stationäre Phasen für die Normalphasenchromatographie sind Kieselsäure oder organische Reste mit Cyano- und aminofunktionellen Gruppen. Für die umgekehrte Phase sind Alkylkohlenwasserstoffe die bevorzugte stationäre Phase; Octadecyl (C18) ist die häufigste stationäre Phase, aber Octyl (C8) und Butyl (C4) werden auch in einigen Anwendungen verwendet. Die Bezeichnungen für die Reversed-Phase-Materialien beziehen sich auf die Länge der Kohlenwasserstoffkette.
Bei der Normalphasenchromatographie eluieren die am wenigsten polaren Verbindungen zuerst und die am meisten polaren Verbindungen zuletzt. Die mobile Phase besteht aus einem unpolaren Lösungsmittel wie Hexan oder Heptan, gemischt mit einem etwas polareren Lösungsmittel wie Isopropanol, Ethylacetat oder Chloroform. Die Retention nimmt ab, wenn die Menge des polaren Lösungsmittels in der mobilen Phase zunimmt. In der Umkehrphasenchromatographie eluieren die polarsten Verbindungen zuerst, während die unpolarsten Verbindungen zuletzt eluieren. Die mobile Phase ist im Allgemeinen ein binäres Gemisch aus Wasser und einem mischbaren polaren organischen Lösungsmittel wie Methanol, Acetonitril oder THF. Die Retention nimmt mit zunehmender Menge des polaren Lösungsmittels (Wasser) in der mobilen Phase zu. Die Normalphasenchromatographie, ein Adsorptionsmechanismus, wird zur Analyse von gelösten Stoffen verwendet, die in organischen Lösungsmitteln leicht löslich sind, basierend auf ihren polaren Unterschieden wie Aminen, Säuren, Metallkomplexen usw.. Die Umkehrphasenchromatographie, ein Partitionsmechanismus, wird typischerweise für Trennungen durch unpolare Unterschiede verwendet.
Die „Hydridoberfläche“ unterscheidet das Trägermaterial von anderen Siliziumdioxidmaterialien; Die meisten für die Chromatographie verwendeten Siliziumdioxidmaterialien haben eine Oberfläche, die hauptsächlich aus Silanolen (-Si-OH) besteht. In einer „Hydridoberfläche“ sind die Endgruppen primär -Si-H. Die Hydridoberfläche kann auch mit Carbonsäuren und langkettigen Alkylgruppen funktionalisiert sein. Mobile Phasen für ANPC basieren auf einem organischen Lösungsmittel (wie Methanol oder Acetonitril) mit einer kleinen Menge Wasser; Somit ist die mobile Phase sowohl „wässrig“ (Wasser ist vorhanden) als auch „normal“ (weniger polar als die stationäre Phase). Somit werden polare gelöste Stoffe (wie Säuren und Amine) am stärksten zurückgehalten, wobei die Retention abnimmt, wenn die Wassermenge in der mobilen Phase zunimmt.Typischerweise muss die Menge der unpolaren Komponente in der mobilen Phase 60% oder mehr betragen, wobei der genaue Punkt der erhöhten Retention von dem gelösten Stoff und der organischen Komponente der mobilen Phase abhängt. Eine echte stationäre ANP-Phase kann sowohl in der umgekehrten Phase als auch in der normalen Phase funktionieren, wobei nur die Wassermenge im Eluenten variiert. Somit kann ein Kontinuum von Lösungsmitteln von 100% wässrig bis rein organisch verwendet werden. Die ANP-Retention wurde für eine Vielzahl von polaren Verbindungen in stationären Phasen auf Hydridbasis nachgewiesen. Neuere Untersuchungen haben gezeigt, dass Siliciumdioxidhydridmaterialien eine sehr dünne Wasserschicht (etwa 0,5 Monoschichten) im Vergleich zu HILISCHEN Phasen aufweisen, die 6-8 Monoschichten aufweisen können. Darüber hinaus ist die erhebliche negative Ladung auf der Oberfläche von Hydridphasen das Ergebnis der Adsorption von Hydroxidionen aus dem Lösungsmittel und nicht aus Silanolen.