i normalfas kromatografi är den stationära fasen polär och den mobila fasen är icke-polär. I omvänd fas har vi precis motsatsen; den stationära fasen är icke-polär och den mobila fasen är polär. Typiska stationära faser för normalfas kromatografi är kiseldioxid eller organiska delar med cyano-och amino-funktionella grupper. För omvänd fas är alkylkolväten den föredragna stationära fasen; oktadecyl (C18) är den vanligaste stationära fasen, men oktyl (C8) och butyl (C4) används också i vissa applikationer. Beteckningarna för de omvända fasmaterialen hänvisar till kolvätekedjans längd.
i normalfas kromatografi eluerar de minst polära föreningarna först och de mest polära föreningarna eluerar sist. Den mobila fasen består av ett icke-polärt lösningsmedel såsom hexan eller heptan blandat med ett något mer polärt lösningsmedel såsom isopropanol, etylacetat eller kloroform. Retentionen minskar när mängden polärt lösningsmedel i mobilfasen ökar. I omvänd fas kromatografi eluerar de mest polära föreningarna först med de mest icke-polära föreningarna som eluerar sist. Den mobila fasen är i allmänhet en binär blandning av vatten och ett blandbart polärt organiskt lösningsmedel som metanol, acetonitril eller THF. Retentionen ökar när mängden polärt lösningsmedel (vatten) i mobilfasen ökar. Normalfaskromatografi, en adsorptiv mekanism, används för analys av lösta ämnen som är lättlösliga i organiska lösningsmedel, baserat på deras polära skillnader såsom aminer, syror, metallkomplex etc.. Omvänd fas kromatografi, en partitionsmekanism, används vanligtvis för separationer av icke-polära skillnader.
”hydridytan” skiljer stödmaterialet från andra kiseldioxidmaterial; de flesta kiseldioxidmaterial som används för kromatografi har en yta som huvudsakligen består av silanoler (-Si-OH). I en” hydridyta ” är terminalgrupperna främst-Si-H. hydridytan kan också funktionaliseras med karboxylsyror och långkedjiga alkylgrupper. Mobila faser för ANPC är baserade på ett organiskt lösningsmedel (såsom metanol eller acetonitril) med en liten mängd vatten; således är den mobila fasen både ”vattenhaltig” (vatten är närvarande) och ”normal” (mindre polär än den stationära fasen). Således behålls polära lösta ämnen (såsom syror och aminer) starkast, med retention som minskar när mängden vatten i mobilfasen ökar.
typiskt måste mängden av den icke-polära komponenten i mobilfasen vara 60% eller större med den exakta punkten för ökad retention beroende på det lösta ämnet och den organiska komponenten i mobilfasen. En sann ANP stationär fas kommer att kunna fungera i både omvänd fas och normala faslägen med endast mängden vatten i eluenten varierande. Således kan ett kontinuum av lösningsmedel användas från 100% vattenhaltig till ren organisk. ANP-retention har visats för en mängd polära föreningar på de hydridbaserade stationära faserna. Nya undersökningar har visat att kiseldioxidhydridmaterial har ett mycket tunt vattenskikt (cirka 0,5 monolager) jämfört med HILISKA faser som kan ha från 6-8 monolager. Dessutom är den väsentliga negativa laddningen på ytan av hydridfaser resultatet av hydroxidjonadsorption från lösningsmedlet snarare än silanoler.